cDNA文库构建

        构建cDNA文库是研究功能基因组学的基本手段之一。cDNA便于克隆和大量表达，它不像基因组含有内含子而难于表达，因此可以从cDNA文库中筛选到所需的目的基因，并直接用于该目的基因的表达。SMART技术的出现是一个新的里程碑。它的原理也非常简单：在合成cDNA的反应中事先加入的3’末端带Oligo（dG）的SMART引物，由于逆转录酶以mRNA为模板合成cDNA，在到达mRNA的5’末端时碰到真核mRNA特有的“帽子结构”， 即甲基化的G时会连续在合成的cDNA末端加上几个（dC），SMART引物的Oligo（dG）与合成cDNA末端突出的几个C配对后形成cDNA的延伸模板，逆转录酶会自动转换模板，以SMART引物作为延伸模板继续延伸cDNA单链直到引物的末端，这样得到的所有cDNA单链的一端有含Oligo（dT）的起始引物序列，另一端有已知的SMART引物序列，合成第二链后可以利用通用引物进行扩增。由于有5’帽子结构的mRNA才能利用这个反应得到能扩增的cDNA，因此扩增得到的cDNA就是全长cDNA。这个方法是利用逆转录酶内源的末端转移酶活性实现的，只要单管，一步即可完成，不需要额外的cDNA抽提纯化或者沉淀，或者额外的酶反应，只需要少至25ng的mRNA或者50ng的Total RNA就可以得到高质量、高产量的cDNA库，更重要的是得到的cDNA能够代表原有样品中的mRNA的丰度，可以应用于直接扩增基因、构建cDNA文库、已知序列钓全长cDNA（RACE），和用于芯片检测的cDNA探针的扩增等。
 

        明琛志远生物技术（北京）有限公司，是一家为国内各大科研院校、研究机构及医疗服务机构提供专业的基因检测和研究服务的生物高科技企业。公司主营业务DNA合成测序、基因工程技术服务、分子生物学试剂盒。公司拥有一流的人才队伍，合理的人才结构，团队的管理层和技术支持是由生物学、农学、医学、企业管理等博士、硕士组成。我们的目标是以DNA合成、测序为龙头，以试剂盒生产为后盾，大力拓展基因工程课题服务，推广拥有自主知识产权的试剂盒产品，把公司做成国际品牌，成为中国基因试剂盒生产和基因检测、基因工程服务的领导者。

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