载体构建与蛋白表达

 杆状病毒表达重组蛋白

昆虫杆状病毒表达系统能有效的弥补大肠杆菌表达系统的缺陷，杆状病毒表达的外源基因产物可以得到各种翻译后修饰，包括磷酸化、糖基化、酰胺化、信号肽切割、二硫键形成等，式表达有功能重组蛋白的理想工具。主要步骤包括重组杆状病毒载体构建、载体和病毒共转染昆虫细胞、筛选重组病毒、病毒滴度放大、小量和大量感染昆虫细胞、获得蛋白。
大肠杆菌表达重组蛋白
步骤一 引物设计、模板提取、基因扩增、载体构建、基因测序。
步骤二 重组质粒DNA导入感受态细胞，通过SDS-PAGE或其它检测评定小量表达结果，评估目的蛋白表达量。
步骤三 大量表达和纯化，并分析表达蛋白。蛋白生产时间3-8周。

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