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本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和 GFP 绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有 Amp 抗性基因，可以无限扩增。
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siRNA载体构建服务程序
1. siRNA表达载体的选用：
本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和 GFP 绿色萤光标记，可以建立稳定表达系，同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有 Amp 抗性基因，可以无限扩增。
2. 设计 siRNA 靶序列
A 、根据目的mRNA序列，设计3条RNA干扰靶序列，靶序列一般为19 － 21nt 长。
B 、对于每条选定的 siRNA 靶序列，设计 siRNA 正义链和反义链，以 loop(9nt) 相连，称为 shRNA（short hairpin RNA ）。
C、阴性对照的设立.
3. 合成模板：
合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链，退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有 RNA PolyIII 聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点，可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。
4. siRNA 空载体用 BamHI 和 HindIII 双酶切后， 1 ％琼脂糖凝胶电泳，回收线性载体。
5. 连接与转化：
把退火的 DNA 模板双链连接到线性载体中。采用 T4 连接酶，插入片断与载体的摩尔比约为 3 ： 1 。连接产物转化 DH5α 大肠杆菌，在 LB Amp 培养基上涂板， 37 ℃ 培养过夜。
6. PCR 鉴定
7. 测序鉴定
8.柱抽提阳性克隆载体并定量。
闪晶生物同时提供腺病毒和慢病毒载体的构建服务,5000.00元/个
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