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凝胶迁移或电泳迁移率(EMSA)对外服务
同位素P32标记探针/生物素/荧光素标记/进行检测
服务类别:分子与细胞总访问:10250
最后更新:2024-5-17半年访问:177
参考报价:详询023-65316016
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凝胶迁移或电泳迁移率(EMSA)

实验技术对外服务

凝胶迁移或电泳迁移(EMSA)原理:

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异),和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

主要仪器:

高速组织捣碎机: SWISS KINEMATIC Ltd. Co(型号:PT1600E)

电泳仪:北京六一仪器厂(型号:DYY-8C)

电泳槽:北京六一仪器厂(型号:DYCZ-24D)

转印槽:北京六一仪器厂(型号:DYCZ-40D)

低温高速离心机:湖南湘仪公司(型号:H2050R)

超低温冰箱:美国FORMA公司(型号:702)

分光光度计:上海分析仪器总厂(型号:721)

脱色摇床:上海琪特分析仪器有限公司(型号:STS-2)

 

主要试剂:

蛋白质预染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd):Fermentas

NC膜:Millipore公司(型号:0.45um)

化学发光底物:PIERCE公司

电泳类生化试剂均为美国amresco公司产品

其他生化试剂为国药集团上海化学试剂公司产品

总蛋白测定试剂盒:南京建成生物工程研究所

NF-KB探针:由Invitrogen公司合成与标记

成像系统:富士FLA-5000全功能激光影像成像系统

EMSA实验步骤:

1.探针的标记:

2、探针的纯化:

3、EMSA 胶的配制:

4、EMSA结合反应:

5、电泳分析:

客户需知:

方法:     生物素/荧光素标记/进行检测。

技术要点: 实验过程包括核蛋白的提取,同位素标记/生物素/荧光素标记/与纯化,凝胶电泳,胶片暴光等。在EMSA操作中会用到同位素,要注意实验室环境和实验员的保护。

客户提供:细胞 25ML的细胞瓶培养的细胞。 组织 200mg-400mg

探针 自备探针。  完成时间:  3-4个星期。

结果交付:  详细实验步骤,和实验图片。

【本平台合作项目】

分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!

【全国免费热线】:400-675-6758

【电话】 023-65316016,023-65316556

【邮箱】 china-western@163.com

【官网网址】www.cqwestern.com

【地址】 重庆高新区生物医药研发产业园D栋

 

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