探针法荧光定量RT-PCR冻干试剂盒(UNG酶)

特别提示：包括探针法荧光定量RT-PCR冻干试剂盒(UNG酶)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：探针法荧光定量RT-PCR冻干试剂盒(UNG酶)
英文名称：Lyophilized TaqMan RT-PCR Kit(UNG)
产品货号：MT0139
产品规格：20μL×200T|20μL×1000T

本试剂盒是以RNA为模板采用TaqMan探针法进行Real-Time PCR的专用试剂，适合于FAM/HEX/TET/JOE/ROX等双标记探针（本品也适用于Molecular Beacon探针），其中冻干RT-PCR试剂将热启动Fast Taq DNA聚合酶、耐热反转录酶、dNTPs等做成冻干品试剂，制品性能稳定，可长期保存。当加入2×TaqMan Buffer溶解后，试剂成为常规一步式探针法RT-PCR单组分预混试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单，只需加入引物、探针、RNA模板、水即可。该制品不含有ROX校正染料，适用于适合于各种荧光标记探针，并且适用于各种定量PCR机型，常用于RNA的相对定量检测，及基因检测和基因诊断试剂开发。

该冻干RT-PCR试剂中的耐热反转录酶具有卓越的热稳定性，在55℃条件下仍然保留90%以上的聚合活性。制品中的Fast Taq DNA聚合酶采用专有的热启动技术确保55℃以下没有任何活性，因此可在室温建立反应体系。Fast Taq DNA聚合酶具有卓越的扩增速度，因此满足快速PCR程序，通常在30min以内可以完成扩增反应。同时该聚合酶具有耐受杂质的能力，同样适用于粗制核酸样本的扩增反应。

由于PCR对核酸的扩增效率极高，在诊断PCR实验中，非常容易造成移液器、台面、PCR仪、空气等气溶胶污染。当实验环境被污染后，会导致阴性样本的假阳性结果。本试剂中，将dNTP中的dTTP全部更换为dUTP，从而使得扩增后的PCR产物中包含dU碱基。在随后的实验中，含有气溶胶污染的dU PCR产物，将被本试剂中的UNG糖基化酶降解，从而去除了气溶胶的污染效应，本试剂中的UNG酶在37℃孵育2分钟，即可消除高达10万个Copy的核酸污染物。因此，本制品是诊断定量PCR检测的最佳试剂。

试剂盒特点：
· 引入UNG，可高效消除气溶胶污染；
· 热启动酶采用专有的修饰方式，30s热启动；
· 冻干粉制品，性能及其稳定；
· 一步法RT-qPCR预混试剂；
· 卓越的扩增性能，耐受样本中的杂质能力强；
· 适用于所有实时定量PCR仪器；

试剂盒组成：
 

组分	规格
Lyophilized RT-qPCR Reagent(UNG)	2瓶
2×TaqMan PCR Buffer 7	1ml×2

保存条件：RT，有效期一年。

反应实例：
以A549细胞RNA为模板，将该模板100ng/μl进行8个2倍稀释，即模板分别为：50ng/μl、25ng/μl、12.5ng/μl、6.25ng/μl、3.12ng/μl、1.5ng/μl、0.75ng/μl、0.38ng/ul、0.19ng/μl，每个反应体系加模板2μl，用本制品进行扩增检测，如图所示，
A：本制品在宽广的模板量区间内具有卓越的线性关系：扩增效率99.2%，R2 =0.9934。
B：以6.25ng RNA为模板进行qPCR检测，共24个重复，由图可看出重复性良好。
C：图A扩增所得标准曲线。


使用方法：

1.溶解冻干制品
每瓶中加入1ml TaqMan PCR Buffer 7溶解冻干制品，溶解后的制品为2×One-Step TaqMan RT-qPCR Mix(UNG)。溶解后的剩余试剂可置于-20℃保存，下次实验融化后直接使用即可。

2.配制反应体系
按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
 

成分	用量	终浓度
2×One-Step TaqMan RT-qPCR Mix(UNG)	10μL	1×
PCR Forward Primer (10μM)	0.4μl	0.2μM
PCR Reverse Primer (10μM)	0.4μl	0.2μM
TaqMan Probe (10μM)	0.4μl	0.2μM
RNA模板(10pg~500ng)	0.5~2μl
ddH2O	up to 20μl

3.进行Real-Time PCR反应，程序如下：
 

温度	时间	循环数	说明
37℃	2min	1	消化污染物
55℃	10min	1	反转录获得cDNA
95℃	35s	1	热启动反应
95℃	5s	40
60℃	20s

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