预包被抗体:试剂盒的酶标板孔内预先包被了特异性的抗人IL-7捕获抗体。
抗原结合:加入标准品或待测样本,样本中的IL-7抗原会与板上的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的检测抗体,该抗体与IL-7抗原的另一位点结合,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”的夹心复合物。
信号放大与显色:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin-HRP),它会与生物素标记的检测抗体结合。最后加入TMB显色底物,HRP催化底物产生蓝色产物,加入终止液后变为黄色。
结果判读:颜色的深浅与样本中IL-7的浓度成正比。通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),并根据标准品浓度与OD值绘制的标准曲线,即可计算出样本中IL-7的含量。
产品属性
| 产品名称 |
人白细胞介素7(IL-7)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031254 |
| 英文名称 |
Human IL-7 ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
特异性:优质试剂盒可特异性检测人源的IL-7,与其他细胞因子无明显交叉反应,保证了结果的准确性。
重复性:板内和板间变异系数(CV)通常小于10%,确保了实验结果的稳定可靠。
样本类型:适用于人血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等多种样本类型。
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度