幼禽螺杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒

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销售商：上海谷研实业有限公司

检验原理

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对幼禽螺杆菌（Helicobacter pullorum）的特异性基因设计引物与探针，通过荧光信号检测实现对病原体核酸的定量分析，适用于临床样本或实验研究中的病原学诊断。

试剂组成

反应液：含PCR缓冲体系、dNTPs等（500μL/管×1或2管）。

酶液：热启动Taq DNA聚合酶（25μL或50μL/管）。

阳性质控品：已知浓度的幼禽螺杆菌DNA（250μL/管）。

阴性质控品：无核酸酶水（250μL/管）。

注意：不同批号组分不可混用。

操作步骤

标准曲线制备（定量分析适用）

将阳性质控品（初始浓度10^11拷贝/μL）按10倍梯度稀释至10^4~10^6拷贝/μL系列浓度，作为标准曲线样品。

每稀释步骤需更换枪头，震荡混匀后冰上保存备用。

样本DNA提取

推荐使用磁珠法或离心柱法核酸提取试剂，按说明书操作。

需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（试剂盒提供）。

qPCR反应体系（20μL/反应）

| 组分 | 体积（每反应） |

| 反应液 | 19 μL |

| 酶液 | 1 μL |

| 模板DNA | 2~5 μL |

程序设置：

预变性：95℃ 2分钟；

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）。

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本中病原体拷贝数。

定性分析：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

注意事项

实验分区操作（样本处理区、试剂配制区、扩增区），避免交叉污染。

反应液需完全解冻后离心混匀，避免反复冻融。

阳性质控品仅用于实验监控，不可作为临床诊断依据。
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