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Incucyte® Exofluor细胞外囊泡快速标记试剂盒上市

浏览次数:1783 发布日期:2024-5-27  来源:赛多利斯实验室
细胞外囊泡(EV, Extracelluar Vesicle)是当今细胞生物学和新诊疗疗法的热点研究领域。EV根据直径大小和生物生成过程分为多种类型,其中大多数尺寸较小的EV被称为外泌体(Exosome)。国家发改委于2022年印发的《“十四五”生物经济发展规划》将“外泌体治疗产品”首次纳入国家经济发展规划,2023年在“囊泡”和“外泌体”方向的国自然金额累计近1.5亿元,立项近390项,超过前两年立项数[1]
 
截止至目前,EV和外泌体在国内外的研究热潮不减[2],在产业端也受到医药、生物技术、体外诊断产品研发生产企业的争相投资。
 
图1. PubMed检索外泌体相关研究论文发表数量 
 
图2. PubMed检索Extracelluar Vesicle相关研究论文发表数量
  
 
活细胞摄取实验EV样本制备的挑战
 
在EV研究的初步阶段,往往需要从干细胞等活细胞培养基,或血液、尿液和唾液等体液中分离出足够量和高纯度的EV。传统的分离技术有沉淀法(P)、超速离心(UF)、体积排阻色谱法(SEC)、免疫亲和捕获(IAC)。这些方法往往耗时耗力,有时因实验者操作原因导致EV得率和纯度都不甚理想。

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赛多利斯EV分离纯化标记新方案
为应对EV分离和纯化的挑战,赛多利斯推出了一种创新的Incucyte® Exofluor细胞外囊泡(绿色)标记试剂盒。这款试剂盒结合了超滤法和膜过滤技术,能够均一化EV尺寸并适应未来的规模化生产。它提供了一个简化且快速的操作流程,特别优化了针对外泌体囊泡颗粒的分离。接下来让我们一起来详细了解一下吧。
Incucyte® Exofluor细胞外囊泡(绿色)快速标记试剂盒
 
轻松3步的活细胞摄取实验EV样品快速制备
Step 1
EV荧光标记30分钟
将EV荧光染料与各种来源EV和外泌体的悬液混合孵育
 
Step 2
超滤去除游离荧光染料5分钟
在赛多利斯Vivaspin® 2 超滤柱中去除游离的EV染料
 
Step 3
过滤去除非EV杂质
已去除游离的EV染料的EV悬液装入注射器,通过赛多利斯Minisart® (0.22 μm) 过滤器来同时完成灭菌并去除残留的EV聚集体
 
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图3. Incucyte® Exofluor细胞外囊泡(绿色)标记试剂盒简便的操作流程
 
通过将从以上3步法简便快速获得的荧光标记EV和外泌体, Incucyte® 实时活细胞成像分析系统与Cell-by-Cell Analysis 和Basic Analyzer软件模块配合使用,为您的EV和外泌体活细胞摄入量化成像研究赋能诸多实验结果准确性提升和新发现的洞察便利:
  
 
1  可摄入细胞类型广泛:标记纯化的EV和外泌体适用于常用摄取实验细胞类型
4. 赛多利斯EV标记试剂盒标记的EV和外泌体可以在多种常用摄取细胞类型和培养基条件下被细胞正常摄取。用EV标记的A549细胞来源外泌体处理后24小时拍摄图像显示,与对照组相比细胞形态没有变化。仅染料处理组提示游离染料不会触发细胞摄取。赛多利斯Exofluor细胞外囊泡快速标记试剂盒染料通过与EV和外泌体牢固结合,均匀地标记小型 EV(如外泌体)的质膜。与 EV 不可逆结合并且可去除游离染料,双管齐下地降低了摄取前或摄取期间染料非特异地附着到其他质膜上的风险。
 
2  兼容不同EV上游处理方法:不同细胞来源和纯化方法(UF, SEC, TFF/IEX色谱法)获得的EV和外泌体经本试剂盒处理后都可被正常摄入细胞
5. Incucyte® 成像结果显示A549人肺腺癌细胞系受体细胞摄取了采用Incucyte® Exofor-Green 标记的各种EV(处理后24 小时)。使用超滤和SEC 方法 (HansaBioMed) 提取A549 来源外泌体,并以2 μg/ 孔用量加入到不同细胞系培养孔中进行处理。使用人血浆来源的外泌体(Abcam,超滤提取法),浓度为 4 μg/ 孔。使用 TFF/IEX 色谱法提取间充质干细胞和 HEK293T 来源的 EV (赛多利斯),并分别以 1.5 × 10⁷和 8.3 × 10⁷颗粒 / 孔用量加入到不同细胞系培养孔中进行处理。
 
3  不干扰细胞的真正摄入:标记后的EV细胞摄入呈浓度依赖性,不干扰细胞生长,并可证明是通过细胞摄取内吞途径而非非特异性细胞渗入
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6. 使用TFF/IEX 色谱法纯化来自HEK293T 细胞的EV,并使用Incucyte® Exofluor Green EV 标记试剂盒进行标记,然后添加到A549 受体细胞中。在2天内每2 小时采集一次相差和绿色荧光图像,并使用Incucyte® Cell-by-Cell 软件分析模块进行分析。
1. 将标记的EV 滴定约40 倍(42×10⁷和1×10⁷ 颗粒/ 孔),并使用平均绿色荧光均值强度来评估EV 摄取情况。可以很好观察到荧光强度显示出的浓度依赖性变化
2. 明场细胞计数分析表明(Phase Object Count, 标准化为t=0),在所有测试的不同浓度的标记EV 下,细胞增殖没有发生变化
3. 将A549 细胞接种后培养过夜,然后在无外泌体的培养基中用细胞内吞抑制试剂Dynasore(0.01 至100 μM)处理。使用Dynasore 处理后,立即加入用Incucyte® Exofor Green 标记的Hansa A549 来源外泌体(2 μg/ 孔)。细胞摄取外泌体受到抑制的抑制剂浓度梯度依赖性作用(IC50=2.72 μM)反映在绿色荧光的强度中(图中展示了24 小时监测数据)
 
 
如果您正在从事EV和外泌体在肿瘤学、干细胞发育生物学、细胞代谢、精准医学等基础研究,或者正在开展前沿小分子药物、抗体和基因细胞治疗等生物药新疗法的研发,需要表征细胞内EV摄取行为的同时评估宿主细胞数量形态的变化,或更好地了解EV摄入和有效载荷对生物功能的影响,那么赛多利斯EV标记试剂盒将是您理想的选择! 
 
  
Incucyte® 活细胞成像分析系统细胞外囊泡分析方案》
 
 
-参考文献-
[1] 1.55亿!2023年外泌体相关国家自然科学基金盘点(blog.sciencenet.cn)
[2] PubMed (https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/)
相关公司:德国赛多利斯集团
联系电话:实验室产品与服务事业部:400 920 9889 / 生物工艺解决方案事业部:400 680 1870
E-mail:info.cn@sartorius.com


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