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天信和人二倍体细胞低血清培养技术平台助力疫苗研发
点击次数:1134 发布日期:2022-4-28  来源:本站 本站原创,转载请注明出处
人二倍体细胞来源于正常人胚胎,为人源有限传代系,在传代过程中保持二倍体核型,避免了传代细胞生产所带来的致癌性风险,具有较高安全性,也较原代动物细胞外源因子传播风险更低,因此被广泛应用于疫苗生产。人二倍体细胞狂犬病疫苗更是被WHO誉为狂犬病疫苗金标准,具有免疫原性好、起效速率快、安全性好、免疫持续时间长等优点。
 
中生天信和针对人二倍体细胞开发了 ToCell® HDC SLM-A低血清细胞培养基,无动物源成分,可适用于MRC5细胞和2BS细胞的低血清高密度贴壁培养。
 
HDC SLM-A细胞培养基
 
HDC SLM-A细胞培养基的特点
◆ 更低的血清添加量    
◆ 无动物源成分   
◆ 更快的生长速度    
◆ 提高生产效率
 
HDC SLM-A细胞培养基的应用
适用于人二倍体细胞低血清高密度贴壁培养环境,并满足水痘、狂犬、乙脑、甲肝等疫苗工艺生产需求。
 
人二倍体细胞低血清培养工艺
 
方瓶培养
以2BS细胞为例:
(1)接种密度:4.5×106cells/T75。
(2)培养液:30ml。
(3)传代时间:72-96h。
(4)传代依据:细胞在方瓶中长成致密单层后进行传代。
(5)培养液pH:不得低于7.0。
细胞工厂培养
   细胞复苏后从方瓶扩增至细胞工厂,一个5层细胞工厂接种100×106cells(按3×104cells/cm2),加培养液150-200ml/层,培养3-4天,待细胞长成致密单层后进行传代。
细胞工厂传代:
(1)缓慢弃去细胞工厂中的培养液,加入PBS润洗1-2遍。
(2)弃去PBS后加入约25ml/层0.25%胰酶溶液(若使用无EDTA的胰酶,可适当延长消化时间)。
(3)充分浸润细胞1-2min后,弃去胰酶,将细胞工厂置于37℃温箱5-6min。
(4)镜检90%以上细胞均变圆变亮后拍打细胞工厂,使细胞分散。
(5)再加入新鲜培养液重悬细胞,并晃动细胞工厂,使细胞从细胞工厂完全脱落。
(6)将重悬好的细胞倒入无菌容器混匀后取样计数,进行下一步扩增、培养。
 
注意事项
(1)保证细胞来源可靠,并检测无支原体及外源病毒污染。
(2)人二倍体细胞连续传代次数有限,需采用低代次细胞用于实验。
(3)每次传代使用新的方瓶、细胞工厂。
(4)弃液时,尽量弃于灭菌容器中,减小污染风险。
(5)细胞工厂接种需加入培养基充分混匀细胞,保证每层细胞数相对均匀。
(6)培养过程中观察细胞时尽可能不要过度晃动细胞工厂,防止已贴壁的细胞有局部脱落可能。
 
异常处理
(1)培养过程中尽可能分开进行种细胞传代。
(2)如遇细胞培养中培养液浑浊,请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样镜检,镜检下有明显游动的微生物则很可能是细菌污染,若不是特别明显可取一些培养液在TSA平板中培养24-72h观察。
(3)如遇培养液清澈,但细胞生长明显受限或死亡,请选择当天不进行细胞实验的房间进行取样,进行支原体或外源病毒检测。
(4)确定污染后务必弃去所有污染细胞、停用使用中的培养基,对实验环境进行彻底消毒灭菌后再进行下批实验。
 
 
关于中生天信和
中生天信和——国药集团·中国生物旗下子公司,致力于为中国生物制药产业提供领先的生物制药过程支撑技术,提升中国生物制药上游原材料以及装备的自主可控能力,加快生物制药产业发展。
【核心优势业务】
个性化细胞培养基开发与生产
生物反应器自主设计与制造
生物制药过程工艺技术开发
 
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