世界首个质谱扫描人乳头瘤病毒HPV双基因分型问世

      世界首个质谱扫描31种人乳头瘤病毒HPV双基因分型问世

经中国医学科学院和第四军医大学与美国西格诺公司合作，联合研究开发的多重PCR-Mass质谱扫描法，于2012年11月9日被美国临床微生物杂志Journal of Clinical Microbiology接收网上发表。

该研究揭示，在女性宫颈癌中HPV检出率>97%，主要为15种高危型；而男同性恋MSM者中，HPV感染型已经超过30种型，特别是>10种型的高混合型感染的严重程度，已经远超过女性的>5种型的程度，其对健康的影响目前还鲜为人知，应当受到高度关注。

该方法用于检测世界卫生组织国际肿瘤研究机构（WHO_ IARC）公布的30种与妇女子宫颈病变相关HPV基因型,包括：15种致癌高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82；3种可能致癌高危型：26，53，66；及12种低危型：6，11，40，42，43，44，54，61，70，

72，81/CP8304和89/CP6108型；以及男性同性恋中高发的84型。检测探针针对两个基因区，致癌性早期转录E6基因和衣壳蛋白晚期转录L1基因，避免了因病毒整合、变异或样本降解而造成的假阴性问题。经两轮扩增和采用先进的飞行质谱MALDI扫描，软件自动分析报告HPV基因型结果，避免了人为目测判断造成的误差，检测灵敏度高达单拷贝/反应。

经对200份同性恋肛拭子DNA标本检测，发现64.5%(129/200) HPV阳性，其中混合型感染者51.9% (67/129)，最高达12种，总共检出31种HPV类型。

经对135例宫颈癌组织标本作对比实验，质谱法与凯普法(GA，CE,SFDA认证) 分别检出HPV基因型为15种和11种，阳性率为97% (131/135) 和90.4% (122/135)。质谱法与凯普法所检测的阳性标本122例和阴性标本4例完全吻合，用测序法补充验证9例凯普检测阴性的标本，结果与质谱法完全一致。质谱法与凯普法分别检出混合型感染者55.6%(75/135) 和25.2% (34/135)，发现最高混合型分别为6种和3种HPV类型。

该方法的主要优势：

高特异性：在高重数引物设计、试剂遴选及特异甄别等方面独具匠心，彻底解决了目前多重探针混合，识别相似基因序列易产生交叉错配的假阳性问题。经几千例样本测试和测序比对，特异性达100%。

高灵敏度：双基因探针、两轮PCR扩增和高特异性探针单碱基延伸反应，飞行质谱扫描，显著提高了检测致病HPV基因型的灵敏度，解决了现行试剂盒中因采用E或L单基因探针检测而出现的结果不一致性及其所致的假阴性问题，达到每个反应单拷贝水平。

防污染：封闭式单孔完成全部反应，无须清洗，产物可即时降解。

通量灵活：每天检测10-1000份样本，每板可检测7800重反应。

高自动化：软件实时判读检测结果，避免了目测判读的人为误差。

低成本：毋需荧光标记，5µL反应体系，试剂用量低。

本方法广泛适用于转化医学研究的各种男女性临床样本：血液、尿液、细胞、咽拭子、肛拭子、新鲜组织及福尔马林固定石蜡包埋组织中31种HPV病毒DNA的分型测试。

本项服务将首先在国内首批医学独立实验室北京德易医检开展。

服务地址：北京市西城区新街口外大街8号  

联系热线：masscan2012@yahoo.com

仪器信息：美国西格诺公司 www.sequenom.com

邮箱：jguo@sequenom.com