上海赛悦生物技术有限公司关于血清问题说明

关于血清使用的几点建议
1、 血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45分装于无菌50ml离心管中，由于血清解冻时体积会增加10％，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。

2、 我公司所提供的血清一般为200ml和400ml装量，因此我们建议您在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清：-20℃→4℃冰箱或冷库溶解24小时→室温下全溶后再分装，一般以50 ml无菌离心管中分装40-45 ml。我们强烈建议您在使用过程中，必须规则地将血清摇晃均匀，小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由-20℃放置至37℃环境下解冻，因为温度改变太大，溶易造成蛋白质凝结而产生沉淀。

3、 血清的灭活（heat-inactivation）一般是指56℃，30分钟水浴加热已完全解冻的血清，加热过程中必须规则地摇晃均匀。此处理的目的是使血清中的补体成分(complement)去活化。但是，经过灭活处理的血清会因而造成沉淀的显著增多，且会影响血清的品质。所以，我公司所生的细胞培养用牛血清不做灭活处理，由客户自行选择。而诊断试剂用血清在除菌过滤前进行过灭活处理。

4、 您在使用血清的时候，勿将血清留置于37℃太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分会因而受到破坏，影响血清的品质。

5、 我公司司提供的高融合细胞培养用小牛血清和标准型细胞培养用小牛血清均采用100纳米进口MILLIPORE滤器连续三次去除支原体的无菌过滤。若您在血清产品中发现悬浮物，除非必须去除，我们建议您将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。

6、 血清的沉淀物
6．1 凝絮物：其产生的原因有多种，但普遍的原因是血清中的脂蛋白（lipoprotein）变形及解冻后血清中存在的纤维蛋白（fibrin）造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。除非必须，如果您想减少这些沉淀物，我们建议您可用离心3000rpm,5min去除，或离心后取上清液加入培养基中一起除菌过滤。

2 显微镜下观察“小黑点”，通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为是血清遭受污染，而将血清放置在37℃中欲培养此“微生物”，但37℃环境下，又会使此沉淀物增多，更会误认为微生物的增殖，但以培养细菌的培养基检测，又没有污染。一般而言，此小黑点不会影响细胞的生长。


血清质量的决定因素
1、 关于牛种
血清质量与牛种没有必然的联系，但有其先天条件。
首先，澳大利亚、新西兰的牛源之所以被国际公认为最好，原因是这些国家的牛源是“无污染”的，“无污染”的实际含义是：病毒等外源因子污染较少。至少美国，由于其国内出现了疯牛病，其形象由此受到挑战。这种血清安全性的观念在发达国家认知度较高，而在我国还不够重视。
其次，牛所能获得的营养 对血清质量有影响。在我国，由于饲养条件的不同， 不同地区产的血清质量是有差异的。

2、 质量标准件的问题
我国对人用生物制品生产所用的牛血清制定了国家标准，我公司前身是：“上海天达公司”、“赛达公司”参与起草和验证了此标准，载于《中国生物制品主要原辅材料质控标准》2000年版，此标准已接接于国外胎牛血清的有关标准。
我公司在国家标准的基础上对各类产品制定了相应的内控标准（网上可查）。至于内毒素：国家标准件为不高于10Eu/ml,内控标准件为不高5Eu/ml或10Eu/ml.国家标准之外的质控指标还有：免疫球蛋白、牛腹泻病毒（BVDV）抗体、激素、和牛源安全性验证等。

3、 牛血清的命名和选择
我公司对细胞培养用牛血清的命名分二类：胎牛血清和小牛血清，小牛各大清特指从出生至采血控制在4小时或12小时之内。

对于一般的细胞系，我公司的小牛血清可以培养的很好。


关于牛血清白蛋白的生产工艺
牛血清白蛋白的制备方法有Cohn′s法、盐析法、热变性法等多种工艺。不同的生产工世其产品的名称、质量指标、应用领域等各不相同。

其中Cohn′s法设备、工艺要求比较高，相对应的生产成本较高，但产品质量较好。牛血清组份V（FrationV）就是由Cohn′s法制备的。一般白蛋白纯度96-99%、外观洁白、结晶性状好、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2，再根据不同的应用分成低内毒素、低脂肪酸等等的不产品，主要应用于细胞培养领域的无血清培养基中。盐析法因生产周期长，纯度低和产品聚合体高、稳定性低等缺陷已很少应用。

目前国内应用比较普遍的是热变性法，结合较先进的超滤生产工艺，其工艺要求相对较低，制备成本低，其缺点是目前应用领域比较单一，仅供免疫诊断试剂使用。但经本公司的努力，目前生产的牛血清白蛋白各项指标已与Cohn′s法相当。下一步我公司将着重开发低内毒素、无蛋白酶、低重金属、低脂肪酸等相关制品，进一步拓展国产牛血清白蛋白的应用领域，为国内生物制品的发展尽一份自已的力量！

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