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新冠病毒研究用水系列三:如何获得完美的核酸电泳条带
点击次数:270 发布日期:2020-5-12  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
在新冠病毒2019-nCoV的分子生物学研究中,电泳技术是一个重要的方法,主要用于核酸、蛋白质的分离与鉴定,使用的实验仪器主要是电泳仪。本文,乐枫纯水为大家总结了实验中常出现的问题和解决方法。
 
核酸电泳用水方案

什么是核酸电泳?
核酸电泳是基因操作的核心技术之一,用于分离、鉴定DNA、RNA 分子混合物和纯化DNA片段。
核酸电泳最让大家头疼的问题 - 异常条带
核酸电泳实验中,常常会遇到条带模糊、拖尾、扭曲等现象,究其原因,除了操作不当,电泳条件未优化,电泳缓冲液也是重要的影响因素之一。电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。
核酸电泳用水方案
 
  • 缓冲液离子强度低,电导率小,导致DNA迁移缓慢;如果多次使用,离子强度降低,PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。
  • 缓冲液离子强度高,则电导率高并明显产热,严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。
 
表1 核酸电泳条带异常原因汇总及建议的解决方法
 
常见问题 原因 解决方法
条带模糊 核酸降解 使用不含核酸酶的超纯水配置缓冲液
电泳缓冲液陈旧 建议经常更换缓冲液
有蛋白污染 使用低有机物的超纯水配置缓冲液
核酸变性 使用超纯水或者缓冲液稀释样品
条带黯淡 核酸浓度过低 增加上样量
核酸降解  使用不含核酸酶的超纯水配置缓冲液
条带被示踪染料掩盖 提高上样量;避免使用与目的片段迁移率相同的示踪染料 
拖带或涂抹带 PCR体系或PCR程序不合适 优化PCR体系和PCR程序
条带扭曲 配胶的缓冲液和电泳缓冲液不同 配胶和电泳中使用同一批缓冲液
电泳时电压过高 控制电泳时电压不超过6V/CM
 

核酸电泳用纯水要求
为了防止水中杂质(如:核酸酶、蛋白质、离子等)对电泳结果的影响,核酸电泳实验配置缓冲溶液或稀释样品需要使用超纯水:
  • 电阻率 18.2 MΩ·cm
  • TOC < 10 ppb
  • 无核酸酶和蛋白酶
  • 细菌总数< 1 CFU/mL
  • 热原< 0.005 EU/mL
  • 0.22μm 或更低的颗粒过滤


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关于乐枫生物
    乐枫生物(Rephile Bioscience,Ltd.) 是一家专业从事高端水纯化和实验室分离纯化产品研发、设计和制造的企业,为高科技生物技术和生命科学领域的用户服务。乐枫公司着眼于全球发展,在中国、美国、法国、印度、南非等近20个国家建立了销售机构,同时也为国际大型公司提供OEM和ODM,产品销往包括欧美的近100个国家。成立十余年,乐枫持续投入研发,创立出了自己的产品品牌RephiLe(瑞枫),推出了多个新概念产品- 无线连接的Genie系列纯水系统和智能型大流量纯水工作站Super-Genie等。目前乐枫纯化柱填料配方齐全,也提供多款密理博纯水系统的兼容耗材。 
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