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该产品依托邻位连接技术,通过寡核苷酸环化与滚环扩增放大信号,原位可视化内源蛋白相互作用,精准区分共定位与真实结合,适配细胞、组织样本,助力蛋白互作及信号通路研究。
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产品描述
本产品为基于邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)技术的可视化蛋白相互作用检测试剂盒,规格为24孔板。PLA技术是一种高灵敏度、高特异性的蛋白互作检测方法,能够在细胞或组织样本中原位检测内源性蛋白的相互作用、修饰及定位。该技术通过抗体偶联的寡核苷酸探针引导连接反应实现信号放大,最终产生可视化的离散点状荧光信号,每个亮点代表一对相互作用的蛋白分子。
本试剂盒提供完成PLA实验所需的核心试剂,能够实现蛋白互作的原位可视化检测,适用于细胞爬片、组织切片等多种样本类型。
产品规格
产品类型:蛋白互作检测试剂盒(PLA技术)
规格:24孔板
检测原理:邻近连接分析(Proximity Ligation Assay)
检测方式:荧光信号可视化检测
适用样本:细胞爬片、组织切片等
信号形式:离散点状荧光信号(每个亮点代表一对相互作用蛋白)
应用建议
本试剂盒适用于蛋白互作相关研究,常见应用包括但不限于:
内源性蛋白相互作用验证:在细胞或组织原位验证两个目标蛋白的物理相互作用。
蛋白修饰检测:检测目标蛋白的翻译后修饰(如磷酸化、乙酰化)及其空间分布。
蛋白定位与共定位分析:研究特定蛋白复合物在亚细胞结构中的定位和动态变化。
低丰度蛋白检测:利用信号放大技术检测低表达水平的蛋白或弱相互作用。
背景信息
邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)是一种将抗体特异性与滚环扩增(RCA)技术相结合的高灵敏度蛋白检测方法。其基本原理是:当两个目标蛋白发生相互作用且距离足够近(通常小于40 nm)时,分别与两种一抗偶联的寡核苷酸探针(PLA探针)会在空间上靠近。通过连接酶的作用,这两条靠近的寡核苷酸链形成环状DNA模板,随后在聚合酶的作用下启动滚环扩增反应,产生一条长的重复序列DNA链。加入荧光标记的互补寡核苷酸探针后,这些扩增产物被标记并形成离散的点状荧光信号,在显微镜下可清晰观察到。
PLA技术的显著优势在于其高特异性和高灵敏度。与传统免疫共沉淀(Co-IP)或免疫荧光共定位相比,PLA能够在保持细胞形态完整的前提下,以单分子分辨率检测内源性蛋白的相互作用,且不受低丰度蛋白或弱相互作用的限制。该技术已广泛应用于细胞信号转导、受体二聚化、表观遗传调控和病毒感染机制等研究领域。本试剂盒为研究人员提供了一种简便、高效的原位蛋白互作检测方案。
保存条件
保存温度:请严格遵循产品说明书或随附标签指示,将各组分保存于指定温度(通常为-20°C或2-8°C),避免反复冻融。
重要提示:不同组分的保存条件可能不同,请勿将所有组分混放。使用前请将试剂平衡至室温。避光保存荧光标记相关试剂。请勿使用超出有效期的产品。
邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA):一种基于抗体特异性识别靶蛋白、通过抗体偶联寡核苷酸链引导连接反应实现信号放大的蛋白互作检测技术。其核心原理是当两个靶蛋白发生相互作用且距离足够近时,抗体偶联的寡核苷酸可通过连接酶形成可扩增的 DNA 片段,最终通过荧光标记探针杂交产生离散点状荧光信号(每个亮点代表一对相互作用的蛋白分子)。

可视化蛋白互作(PLA)实验流程

抗体-A+抗体-B结合目标蛋白 → DNA探针靠近 → 连接 → 扩增 → 信号检测
1) 封闭样本
2) 一抗孵育: 两种一抗分别与位于一种蛋白质或两种邻近蛋白质上的目标表位结合
3) Navenibody孵育: Navenibodies(与专有寡核苷酸臂结合的精选抗体)与各自的一抗结合
4) DNA circle形成: 当 Navenibodies 靠近时 , 附着的寡聚物能形成 DNA circle ,通过减少非特异性背景染色来保证高特异性5) 扩增和检测 :加入聚合酶后 , 就会启动 滚环循环扩增过程。 标记的探针与扩增的 DNA结合 , 显色形成亮点
详情点击→ https://www.u-labex.com/detail-lxrplac24-1.html?mk_channel=SWQC