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该产品采用邻近连接技术,通过滚环扩增放大荧光信号,原位直观区分蛋白共定位与真实互作,兼容石蜡、冰冻组织切片,助力临床组织蛋白互作与信号通路研究。
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| 服务商: 上海乐备实生物技术有限公司 | 查看该公司所有服务 >> |
产品描述
本产品为LabEx提供的基于邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)技术的可视化蛋白互作检测服务,专为组织切片样本设计。该技术利用一对特异性抗体识别目标蛋白,当两个靶蛋白发生相互作用且距离足够近时,抗体偶联的寡核苷酸链通过连接酶形成可扩增的DNA片段,最终通过荧光标记探针杂交产生离散点状荧光信号,实现对组织切片中蛋白相互作用的原位可视化检测。
本服务仅限研究用途,不可用于人类或动物的临床诊断或治疗。
产品规格
服务形式:基于PLA技术的组织切片蛋白互作检测服务
适用样本:组织切片
检测原理:抗体偶联寡核苷酸引导的邻近连接与信号扩增
检测结果:离散点状荧光信号(每个亮点代表一对相互作用的蛋白分子)
应用建议
本检测服务适用于蛋白质互作研究,常见应用场景包括但不限于:
组织切片中蛋白质相互作用的原位验证:在保留组织形态结构的条件下,验证特定蛋白对之间的物理相互作用。
信号通路研究:分析组织微环境中信号通路关键蛋白的复合物形成与空间分布。
疾病机制研究:在病理组织切片中,研究疾病状态下蛋白质互作网络的改变。
药物靶点验证:在组织水平上评估候选药物对靶蛋白相互作用的调控效果。
背景信息
邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)是一种突破性的原位检测技术,能够在组织或细胞水平上可视化蛋白质之间的相互作用、翻译后修饰及蛋白复合物形成。该技术将免疫学的特异性识别能力与分子生物学的高效信号扩增能力相结合,克服了传统免疫共沉淀(Co-IP)需要裂解细胞、无法获得空间定位信息的局限性。
PLA技术的基本流程包括:首先使用两种特异性一抗分别识别目标蛋白A和蛋白B;随后加入偶联有独特寡核苷酸链的次级抗体(Navenibody);当两个目标蛋白相互作用且距离小于40纳米时,两寡核苷酸链靠近并连接形成环状DNA模板;加入聚合酶后启动滚环扩增反应,产生长重复序列的DNA产物,最后通过荧光标记探针杂交,每个扩增产物呈现为一个离散的荧光亮点。这种点状信号可借助荧光显微镜进行定量分析,且与背景信号区分明显。PLA技术已广泛应用于肿瘤研究、神经科学、信号转导及药物开发等领域,成为蛋白质功能研究的强大工具。
保存条件
本产品为定制化检测服务,非实体试剂,因此不适用常规保存条件。
样本的采集、运输与保存需严格遵循服务提供方的指导说明。建议新鲜采集的组织样本尽快进行固定处理(如福尔马林固定、石蜡包埋),若需运输或短期保存,应置于适当保存液中于2-8°C暂存,避免反复冻融。
邻近连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA):一种基于抗体特异性识别靶蛋白、通过抗体偶联寡核苷酸链引导连接反应实现信号放大的蛋白互作检测技术。其核心原理是当两个靶蛋白发生相互作用且距离足够近时,抗体偶联的寡核苷酸可通过连接酶形成可扩增的 DNA 片段,最终通过荧光标记探针杂交产生离散点状荧光信号(每个亮点代表一对相互作用的蛋白分子)。

可视化蛋白互作(PLA)实验流程

抗体-A+抗体-B结合目标蛋白 → DNA探针靠近 → 连接 → 扩增 → 信号检测
1) 封闭样本
2) 一抗孵育: 两种一抗分别与位于一种蛋白质或两种邻近蛋白质上的目标表位结合
3) Navenibody孵育: Navenibodies(与专有寡核苷酸臂结合的精选抗体)与各自的一抗结合
4) DNA circle形成: 当 Navenibodies 靠近时 , 附着的寡聚物能形成 DNA circle ,通过减少非特异性背景染色来保证高特异性5) 扩增和检测 :加入聚合酶后 , 就会启动 滚环循环扩增过程。 标记的探针与扩增的 DNA结合 , 显色形成亮点