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TaqMan MicroRNA检测试剂盒
英文名称:TaqMan® MicroRNA总访问:78836
国产/进口:进口半年访问:389
产地/品牌:美国应用生物系统公司(ABI)产品类别:分子生物学试剂
规       格:TaqMan® MicroRNA 最后更新:2025-1-24
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销售商: 赛默飞世尔科技(Life Technologies) 查看该公司所有产品 >>
  • 产品介绍
  • 公司简介
特点:
· 高特异性—只对成熟MicroRNAs进行定量,而不受其前体干扰
· 快速,简单—整个操作只需两步,不到3个小时,即可获得高质量的数据
· 灵敏—样品消耗少,仅需1-10ng的total RNA或同等物
· 超宽的线性范围—可跨越7个数量级

· 引 言
[FrontPage 保存结果 组件] MicroRNAs (miRNAs)是指生物体内天然产生的一群高度保守的短的单链RNA(~22个碱基),由其发夹状前体转录子经剪切而成。

MicroRNAs 由特定基因编码,但不翻译成蛋白,其功能是通过降解靶向mRNAs或(更多情况下是)阻断其翻译过程从而调控基因的表达。

研究者们相信,MicroRNA调控一些参与许多重要生理或病理过程的关键基因,涉及癌症,代谢和基础发育过程等。

· 面临的挑战—只专一定量有活性的成熟miRNAs,而不受其前体干扰
虽然细胞内miRNAs的两种形式,即前体和成熟体,都存在,但只有短的成熟体具备生物活。目前,最常用的检测和定量MicroRNA的方法是northern杂交, 芯片(microarrays)以及核糖核酸酶保护分析(ribonuclease protection assays),这些传统方法都需要标记探针并与纯化的RNA进行杂交。

成熟的活性miRNAs及其前体共享一段相同的靶序列,而基于杂交的各种技术又无法通过分子大小将它们区分,因此很难专一性的识别成熟miRNAs,结果导致很高的前体背景信号。

基于杂交的各种技术需要标记步骤或放射性同位素,费时且昂贵,所得数据的动态分布范围又很有限.

· TaqMan® MicroRNA检测试剂—实时荧光定量PCR技术的革命
通过对设计方法的创新性改进,ABI如今已能够将TaqMan®技术的专一性、灵敏性及便捷性与实时定量PCR技术结合起来,用于miRNA的检测和定量。

TaqMan® MicroRNA检测试剂的基础在于靶向特异性的茎环状反转录引 物。这项创新的设计克服了miRNA定量中最大的难题:即小RNA分子太短(~22 nt),无法按常规设计随机引物进行反转录和实时PCR。茎环状结构的引物有两大好处:1)专一性的与成熟miRNA结合。2)形成反转录引物/成熟miRNA复合物,并在miRNA的5’末端延伸。这样就得到一个较长的反转录扩增子,为进一步做实时定量PCR提供了符合要求的摸板。

为了确保准确的实验结果,每个TaqMan® MicroRNA试剂盒都经过严格的实验室验证。
 
· 区分高度同源的成熟miRNAs
TaqMan® MicroRNA检测试剂不仅可以专一性识别成熟miRNAs,还可以在高度同源性的miRNAs之间进行区分,在某些实验中甚至只有一个碱基的差异都能鉴别(图3)。这意味着研究者可以确信所检测的是具有生物活性的成熟miRNAs而非其前体,而且序列高度同源的miRNAs也被非常精确地区分开来。

例如,我们实验室对let-7a家族成员进行检测时最高相对定量百分比是3.7%(存在于仅相差一个碱基的let-7a和let-7d之间),大多数家族成员两两之间并未检测到交叉反应
· 最低限度的样品消耗量
TaqMan® MicroRNA检测技术灵敏度极高—研究者仅需1-10ng纯化后的总RNA或同等物就可对感兴趣的miRNAs进行可靠定量。如此之高的灵敏度使得研究者可以用有限的样品做更多的实验,比如做全套miRNAs表达谱研究。也有利于诸如干细胞,配对的人类肿瘤/健康对照等珍贵且很难获得的样品的节约使用。
 
· 无可比拟的动态分布探察范围
TaqMan® MicroRNA检测试剂可定量检测的范围跨越7个数量级,从几个拷贝一直到几百万个拷贝,这意味着研究者可以准确的知道所用实验材料的每个细胞所含的目标miRNA分子多还是少—这一点很重要,因为miRNA的表达丰度在不同种类的细胞,组织以及疾病中变化范围很大。

如此高的精度使得TaqMan® MicroRNA检测试剂具有很好的重复性,由不同的研究者操作时也能体现。
 
· 快速获取结果
利用一流的TaqMan®试剂,结合通用循环条件,TaqMan® MicroRNA检测技术同样可以很便捷的实现。从总RNA样品开始,应用整套的ABI实时荧光定量PCR体系,不到3个小时即可获得结果。
 
· 方便灵活
TaqMan MicroRNA检测试剂是预先设计好并经功能性验证过的,可以很方便的从ABI获得试剂盒现货。您只须将宝贵的时间用于结果分析上,而无须纠缠于设计和繁杂的技术问题。

利用TaqMan MicroRNA检测技术可以轻松的实现高通量筛选。人类全套装试剂盒(Human Panel – Early Access Kit)中包含的所有157种miRNAs分装在两块96孔板里。如要对这157种miRNA进行有严格统计学意义的检测,则每个样重复4次,加上对照仅需跑2块384板就可以完成。

而且,一旦拥有TaqMan® MicroRNA检测试剂将为研究者提供一个更为灵活的平台,研究者可以检测整套miRNAs也可以选择其中的一些试剂盒进行实验,满足大规模初筛及进一步锁定目标深入研究的需要。
 
物超所值
虽然单个反应的费用与芯片(microarray)相当,但无疑TaqMan® MicroRNA检测技术更具竞争力。这不仅因为它使用的方便与高通量性,还因为它能提供实时PCR的卓越品质,即高特异性、高灵敏度以及宽幅的检测范围。
 
· 与Northern比较
最近有研究表明,如果两种技术都在理想条件下操作,Northern的结果与TaqMan® MicroRNA检测技术能够吻合。但是,TaqMan® MicroRNA检测技术仍然是更好的选择,因为:
· 它具有很高的分辨力,能区分高度同源的miRNA序列
· 它操作简单,当天出结果。实验过程一般少于3个小时。
· 它灵敏度高,极少量的样品即可满足要求(仅需1-10ng total RNA或等同物)
· 它有异常宽幅的检测范围,达到7个数量级
 
· 目前可供产品
为了尽早让TaqMan® MicroRNA检测试剂的优越品质惠及研究者,ABI首次推出了两款先导产品:
1. TaqMan® MicroRNA检测试剂--人类全套装试剂盒(Human Panel – Early Access Kit)
该产品囊括了目前已鉴定并登录Sanger miRNA数据库(http://www.sanger.ac.uk)的人类miRNA中的绝大多数。

试剂盒里提供了每种试剂足够做20次反应的剂量(20uL),足以进行数次全套miRNA筛选。表1中列有试剂盒里包含的所有检测内容,包括非人类的阴性对照。

许多成熟miRNA序列在相近物种中是一致的,因而人类全套装试剂盒中的大多数成员也适用于小鼠和大鼠。每种检测试剂在人类、小鼠及大鼠中的相互兼容信息详表可从网上下载(mirna.appliedbiosystems.com)。

2. TaqMan® MicroRNA检测试剂--ABM 000008 hsa-miR-16
该产品是专门针对成熟型miR-16的单个试剂装。单装试剂使得客户不必太破费购买全套装即有机会体验TaqMan® MicroRNA 检测技术。miR-16已被选为人类miRNA定量实验的阳性对照,因其在大多数组织中均具有高水平的表达。由于成熟miR-16的序列在人类、小鼠及大鼠中完全一致,因而该试剂盒同样可用于定量小鼠和大鼠的miR-16.
更多的TaqMan® MicroRNA检测试剂单一装产品清单很快就会在网页上公布(mirna.appliedbiosystems.com)。
 
· MicroRNA 试剂的命名法则
为便于客户订购和辨认,MicroRNA 检测试剂使用一套独特的ABI试剂ID进行编号命名,每个ID 对应一个特定的成熟miRNA序列。因为在Sanger miRNA数据库中同一段成熟miRNA序列在不同的物种中可能有多个不同的名称,所以我们在每个TaqMan MicroRNA检测试剂产品中都附送一张刻有检测试剂详细信息的文档光盘,文档中提供了人类全套装试剂盒中所有试剂相对应的Sanger miRNA数据库中的名称信息以及登录号。

例如,ABM 000008检测的序列是:
UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG
而在Sanger miRNA数据库中(截止2004年12月)就有以下三种成熟miRNA共享该序列:
名 称 登 录 号#
hsa-miR-16 (MI0000070)
mmu-miR-16 (MI0000565)
rno-miR-16 (MI0000844)
 
· ABI实时PCR仪
TaqMan MicroRNA 试剂与ABI实时PCR平台相结合即为研究者构建了一个完整的miRNA定量检测方案。ABI提供最为齐全的实时PCR仪产品,包括:

· ABI7300实时PCR系统—经济型,能提供基础研究者所需要的高质量数据和关键功能。

· ABI7500实时PCR系统—多功能平台,带有5色标记检测、快速热循环(可以预先配置快速系统,也可日后升级)以及便于基因表达数据分析查看的相对定量软件等附加功能。

· ABI7900HT快速实时PCR系统—机动性与性能的完美结合。用户可在384孔、96孔、96孔快速以及TaqManÒ低密度芯片热循环block等功能之间自由切换,还可配上机械自动进样装置,这样就在实时PCR平台上提供了无与伦比的通量和超强功能。
 
· TaqMan®的优势
TaqMan MicroRNA试剂盒的下列特点解决了miRNA定量领域所面临的重大挑战:
· 高特异性,包括将成熟miRNA与无活性的前体区分开来。
· 快速,在3个小时以内提供可升级处理的结果
· 高灵敏度,以纳克级的样品提供可靠的结果
· 超宽幅的范围精确检测,用户可放心检测miRNA,而无须多虑其拷贝数的多寡
· 经济划算,单个反应的耗费与芯片相当,但提供的数据质量却比芯片高得多。
 
订购信息
Early Access 产品 产品货号
TaqMan® MicroRNA 检测试剂
人类全套装试剂盒(Human Panel – Early Access Kit) 4365409
内容:
157种人类miRNA检测试剂,每种能做20次反应
· 4块96孔板 (2块逆转录引物板, 2块TaqMan® MicroRNA探针板)
· 逆转录引物: 5X reaction mix (15 µL rxn)
· TaqMan® MicroRNA探针: 10X reaction mix (20 µL rxn)
· 24张封板膜
· 包装插入物
· 1张CD光盘,刻有探针信息文档 (AIF)、操作步骤以及快速索引卡片

TaqMan® MicroRNA 检测试剂—ABM 000008 hsa-miR-16 4365746
内容:
· 逆转录引物和TaqMan MicroRNA探针各1管
· 150次反应的用量 (20 µL)
· 逆转录引物: 5X reaction mix (15 µL rxn)
· TaqMan® MicroRNA探针: 10X reaction mix (20 µL rxn)

TaqMan® MicroRNA 检测试剂盒使用所需的相关配套产品
高容量cDNA反转录试剂盒(200次反应) 4322171
一个200次反应的试剂盒足够做大约1000次TaqMan MicroRNA 逆转录反应
请注意:
TaqMan MicroRNA检测试剂与高容量cDNA反专录试剂盒提供的逆转录酶
配套使用是经过优化的,使用别的逆转录酶可能会产生极不稳定的结果,
因而不受ABI支持

RNA酶抑制剂 (2,000 单位) N8080119
2管,各100 µL (20 units/µL),足够一整个套装TaqMan MicroRNA
检测试剂盒筛选的用量

TaqMan 2X Universal Master Mix, No AmpErase® UNG (5 mL) 4324018
TaqMan 2X Universal Master Mix, No AmpErase® UNG (2 x 5 mL) 4364341
TaqMan 2X Universal Master Mix, No AmpErase® UNG (10 x 5 mL) 4324020
2个5 mL装即可满足一整个套装TaqMan MicroRNA检测试剂盒筛选的需要


有关TaqMan MicroRNA 检测技术的最新信息,请访问mirna.appliedbiosystems.com


本产品仅供研究使用。

用户须知:
TaqMan® 探针受美国专利5,723,591保护,美国以外的复制品及专利权属于ABI公司,并受美国专利5,801,155 和 6,084,102保护,该产品在美国以外生产必须征得ABI公司许可。

用户须知:关于豁免许可
本产品是经优化在PCR及5'' 核酸酶检测技术中使用,后者是Roche 分子系统有限公司和F. Hoffmann-La Roche 有限公司的专利技术。一旦购买本产品,用户使用PCR技术即无须另行取得该专利许可。用户购买ABI公司的试剂使用正规生产的或是购自ABI公司的PCR仪即已同时获得使用PCR技术进行研发活动的许可权。更多有关购买PCR技术使用许可权的信息可向ABI或Roche公司有关部门咨询,联系方式:Director of Licensing, Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404,或者 the Licensing Department at Roche Molecular Systems, Inc., 1145 Atlantic Avenue, Alameda, California 94501, USA.

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