北耶林梭菌

商品属性：

产品名称	北耶林梭菌	规格	冻干粉
英文名称	Clostridium beijerinckii	货号	YS-JZ2812
生长条件	37℃；24-48h；厌氧	用途	仅供科研

培养基 胰蛋白胨：15.0g，大豆胨：5.0g，氯化钠：5.0g，无菌脱纤维羊血：5%，琼脂：15.0g，pH：7.3±0.2(25℃)
生长条件 37℃；24-48h；厌氧；
形态 菌落直径为1-2mm，形状不规则，边缘不规则，不透明，正面灰白色，形态扁平，表面粗糙，表面灰暗，易挑起，G＋（蓝紫色），杆菌
模式菌株 no
操作步骤 ①准备上述平板2块；②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水（置于厌氧环境平衡24h）打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入2块平板，200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

常规保藏：
1、短期保藏：斜面培养基 2-8℃密封保存，传代次数严格控制在 5 代以内，避免多次传代导致遗传漂变、毒力下降。
2、长期保藏：用 20% 甘油菌液置于 - 80℃超低温冰箱冻存，可稳定保藏 2-5 年，菌株活性与表型无明显变化。
3、活化操作：冻干菌株首次活化需全部溶解使用，接种于添加 5% 脱纤维羊血的血琼脂平板，37℃厌氧环境下培养 24-48 小时，复苏延迟生长的菌株可适当延长培养时间。

操作步骤：
1. GBS标准菌株复苏与体外活化培养
复苏保存于-80℃超低温环境的GBS模式菌株（ATCC 13813），室温快速复溶后，采用无菌划线技术将菌液接种于5%脱纤维羊血琼脂固体培养基。置于37℃常规恒温培养体系（无CO₂富集条件）培养24~48h，观测菌落表型，筛选出灰白色、表面光滑、呈β-溶血特性的圆形菌落。实验体系严格限定菌株传代次数≤5代，规避长期传代引发的遗传漂变、毒力衰减及功能酶活性丧失等菌株性状变异问题。
2. 临床标本选择性增菌富集处理
对生殖道拭子、血液、脑脊液等临床GBS检测标本进行即时接种，分别置于LIM肉汤、TransVag选择性增菌液体培养基中进行富集培养。37℃恒温孵育18~24h，利用培养基中庆大霉素与萘啶酸的选择性抑菌作用，抑制非目标杂菌增殖，实现低载量GBS菌株的富集浓缩。该增菌步骤为检测前置必备流程，即便开展分子核酸检测仍需执行，可使检测灵敏度提升90%以上，有效覆盖非溶血表型GBS菌株，降低漏检率。
3. 菌株分离纯化及表型初步鉴定
将增菌富集后的菌液划线接种于GBS特异性显色培养基，35±2℃恒温培养18~24h。筛选培养基上特征性蓝绿色、紫罗兰色可疑菌落，经革兰氏染色后进行显微形态学观察，目标菌株为革兰氏阳性链状球菌。通过3%过氧化氢溶液进行触酶活性检测，无产气反应可排除触酶阳性葡萄球菌属污染，完成GBS菌株的初步分离鉴定与杂菌剔除。

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