商品属性:
| 产品名称 |
贝莱斯芽孢杆菌 |
规格 |
冻干粉 |
| 英文名称 |
Bacillus velezensis |
货号 |
YS-JZ2788 |
| 生长条件 |
30℃;18-24h;好氧 |
用途 |
仅供科研 |
培养基 酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,氯化钠:10.0,琼脂:15.0,pH:7.0±0.2(25℃)
生长条件 30℃;18-24h;好氧
形态 菌落直径为2-4mm,形状不规则,边缘不规则,正面灰白色,表面褶皱,质地湿润,不产色素,G+(蓝紫 色),杆菌,纯度:纯
模式菌株 no
操作步骤 ①准备上述平板 1-2 块;②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入平板中 200μL/个,涂布均匀;④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
参考用途 产大环内酯类化合物
常规保藏:
1、短期保藏:斜面培养物 2–8℃密闭保存,严格限制传代次数≤5 代,减少遗传漂移与毒力衰减。
2、长期保藏:以 20% 甘油保护剂制备菌悬液,-80℃超低温冰箱冻存,可稳定保藏 2–5 年,表型与活性稳定。
3、活化步骤:冻干菌株全量复溶后接种,在添加 5% 脱纤维羊血的血平板上 37℃厌氧培养 24–48 小时;生长缓慢菌株可延长培养。
操作步骤:
1. 标准菌株复苏与活化培养
提前准备-80℃超低温保存的GBS标准菌株(代表性菌株ATCC 13813),取出后立即置于室温环境快速解冻,避免低温长时间放置影响菌株活性。全程无菌操作,使用灭菌接种环蘸取适量融化菌液,采用标准四区划线接种技术,均匀涂布于5%脱纤维羊血琼脂平板表面。将平板倒置放入37℃恒温培养箱,无需补充二氧化碳气体,持续培养24~48小时。培养后观察菌落形态,正常GBS菌落为灰白色、表面光滑、边缘圆润,具备典型β-溶血环。为保障菌株性状稳定,实验全程严格控制传代次数,最大传代次数不超过5代,从源头避免菌株遗传漂变、毒力下降、酶活性丢失等实验误差。
2. 临床样本前处理及选择性增菌培养
收集阴道、直肠拭子及血液、脑脊液等临床疑似GBS感染样本,采样后立即进行接种处理,避免样本放置过久导致菌株失活、杂菌过度增殖。将样本分别接种于LIM肉汤或TransVag专用选择性增菌肉汤中,混匀后置于37℃恒温培养环境孵育18~24小时。该类增菌肉汤含庆大霉素、萘啶酸双重抑菌成分,可有效抑制样本中杂菌繁殖,针对性富集低丰度GBS菌株。实验质控要求:无论后续采用何种检测方式(含核酸检测),前置选择性增菌步骤为必做流程,可使GBS检出灵敏度提升90%以上,有效解决非溶血表型GBS菌株漏检问题。
3. 目标菌株分离纯化与初步鉴别
取孵育完成的增菌肉汤培养液,严格无菌操作下划线接种于GBS专用显色培养基,设置培养温度35±2℃,恒温避光培养18~24小时。培养结束后观察平板菌落特征,筛选出蓝绿色、紫罗兰色的典型可疑菌落。对可疑菌落进行革兰氏染色制片,通过光学显微镜观察菌体形态,GBS菌株呈现革兰氏阳性、链式排列的球菌形态。随后开展触酶试验验证,向菌落样本滴加足量3%过氧化氢试剂,观察无气泡生成,可完全排除触酶阳性的葡萄球菌属杂菌,最终完成GBS菌株的初步纯化与鉴定。
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