大丽轮枝菌

商品属性：

产品名称	大丽轮枝菌	规格	冻干粉
英文名称	Verticillium dahliae Kleb.	货号	YS-JZ1763
生长条件	25℃；5-8d；好氧	用途	仅供科研

培养基 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）：马铃薯浸粉：6.0，葡萄糖：20.0，琼脂：15.0，pH：5.6±0.2（25℃）
生长条件 25℃；5-8d；好氧；
形态 菌落直径为 3-5cm，白色至浅灰色，绒状，表面粗糙，产生微菌核，分生孢子梗轮生，霉菌，纯度：纯
分离基物 病株维管束
模式菌株 no
操作步骤 ①准备上述平板 1-2 块；②生物安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中 200μL / 个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。
参考用途 质量控制菌株植物病原真菌（黄萎病）研究

常规保藏：
1、短期保藏要求：斜面培养基密封后在 2-8℃条件下贮存，传代次数严格控制在 5 代以内，防止多次传代导致菌株遗传特性改变、毒力减弱。
2、长期保藏要求：以 20% 甘油菌液形式在 - 80℃超低温冰箱冻存，可稳定保藏 2-5 年，菌株活力与表型无明显变化。
3、活化操作要求：冻干菌株首次活化须全部溶解使用，接种于含 5% 脱纤维羊血的血琼脂平板，37℃厌氧培养 24-48 小时，对生长延迟菌株适当延长培养时间。

操作步骤：
1. GBS标准菌株复苏与体外活化培养
复苏保存于-80℃超低温环境的GBS模式菌株（ATCC 13813），室温快速复溶后，采用无菌划线技术将菌液接种于5%脱纤维羊血琼脂固体培养基。置于37℃常规恒温培养体系（无CO₂富集条件）培养24~48h，观测菌落表型，筛选出灰白色、表面光滑、呈β-溶血特性的圆形菌落。实验体系严格限定菌株传代次数≤5代，规避长期传代引发的遗传漂变、毒力衰减及功能酶活性丧失等菌株性状变异问题。
2. 临床标本选择性增菌富集处理
对生殖道拭子、血液、脑脊液等临床GBS检测标本进行即时接种，分别置于LIM肉汤、TransVag选择性增菌液体培养基中进行富集培养。37℃恒温孵育18~24h，利用培养基中庆大霉素与萘啶酸的选择性抑菌作用，抑制非目标杂菌增殖，实现低载量GBS菌株的富集浓缩。该增菌步骤为检测前置必备流程，即便开展分子核酸检测仍需执行，可使检测灵敏度提升90%以上，有效覆盖非溶血表型GBS菌株，降低漏检率。
3. 菌株分离纯化及表型初步鉴定
将增菌富集后的菌液划线接种于GBS特异性显色培养基，35±2℃恒温培养18~24h。筛选培养基上特征性蓝绿色、紫罗兰色可疑菌落，经革兰氏染色后进行显微形态学观察，目标菌株为革兰氏阳性链状球菌。通过3%过氧化氢溶液进行触酶活性检测，无产气反应可排除触酶阳性葡萄球菌属污染，完成GBS菌株的初步分离鉴定与杂菌剔除。

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