加氏乳杆菌是人体肠道中重要的共生益生菌,其核心检测原理围绕菌株的肠道定殖与抗菌特性展开,是益生菌制剂与微生态研究应用广泛的菌株。
产品名称:
加氏乳杆菌
英文名称:Lactobacillus gasseri
规格:冻干粉
货号:YS-JZ1361
培养基 MRS培养基:蛋白胨10.0,牛肉浸粉8.0,酵母提取物4.0,葡萄糖20.0,吐温80 1.0,磷酸氢二钾2.0,乙酸钠5.0,柠檬酸三铵2.0,硫酸镁0.2,硫酸锰0.05,琼脂15.0,pH6.2±0.2(25℃)
生长条件 37℃;24-48h;微厌氧;
形态 菌落乳白色,细小光滑,G+,杆菌,纯度:纯
分离基物 人体肠道
模式菌株 no
操作步骤 ①准备上述平板1-2块;②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取0.5mL无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入平板中200μL/个,涂布均匀;④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
检测原理:
一、核心遗传背景基础原理
加氏乳杆菌属于乳杆菌属,基因组具备乳杆菌属保守基因,携带乳酸合成功能基因,可发酵碳水化合物产乳酸。物种特异性标记序列稳定,发酵性状传代不易丢失,与卷曲乳杆菌等近缘乳杆菌存在遗传差异。
二、菌株检测与鉴定核心原理
加氏乳杆菌检测采用革兰染色、糖发酵生化试验结合分子鉴定。选择性培养基分离初筛乳杆菌;扩增物种特异性基因,区分加氏乳杆菌与其他乳杆菌菌种。
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山梨醇脱氢酶(SDH)重组蛋白 |
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法尼基二磷酸法尼基转移酶1(FDFT1)重组蛋白 |
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| 肺炎支原体 |
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含铜胺氧化酶3(AOC3)重组蛋白 |
| 弗氏耶尔森菌 |
周期素依赖性激酶抑制因子3(CDKN3)重组蛋白 |
冻干粉菌种复苏中注意事项:
1、冻干粉菌种在未启动活化实验、计划长期存放的前提下,建议置于-20℃恒温环境保存,可有效避免菌种活性衰减。
2、得益于真空冷冻干燥工艺,菌种可长期休眠保存,但冻干管开启后真空环境消失,菌粉易受污染、失活,因此单次开管必须一次性用完所有菌粉,不可留存下次使用。
3、冻干制剂中牛奶保护剂为主要成分,功能性菌体含量较少,若复苏时仅接种部分菌悬液,会因菌体数量不足导致无法正常生长,因此需全部接种至新鲜培养基。
4、长期休眠的冻干菌种复苏适应周期较长,属于正常现象,若标准培养时间内无菌落萌发,无需判定菌种失效,可延长培养24小时甚至更久等待生长。
5、刚复苏的初代菌种生长性能不稳定,存在活性波动,行业通用标准为连续继代培养2次,待菌种生长特性、代谢活性稳定后,方可投入实验使用。
6、冻干管开启操作具备一定专业性和风险性,非专业人员禁止操作;分级开展无菌作业:三级生物风险菌种需在生物安全柜操作,普通菌种可在超净台操作,开管时重点做好面部防护。
7、菌种复苏、开管的全部操作场景需为无菌净化环境,实验结束后所有实验器具、耗材不得随意丢弃,必须经高压灭菌消毒后统一销毁。
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