单核增生李斯特菌是引发食源性李斯特菌病的严重病原菌,其核心检测原理围绕菌株的内化素等毒力因子与低温生长特性展开,是食品安全检验与致病机制研究最受关注的食源性病原菌之一。
产品名称:
单核增生李斯特菌
英文名称:Listeria monocytogenes (Murray et al.) Pirie
规格:冻干粉
货号:YS-JZ1231
培养基 牛脑浸粉:4.0,牛心浸粉:4.0,蛋白胨:5.0,酪蛋白胨:16.0,氯化钠:5.0,葡萄糖:2.0,磷酸氢二钠:2.5,琼脂:13.5,pH:7.4±0.2(25℃)
生长条件 37℃;18-24h;好氧;
形态 菌落直径为0.5-1mm,圆形,边缘整齐,不透明,正面灰白色,中间凸起,表面光滑,表面明亮,质地湿润,G+(蓝紫色),杆菌,纯度:纯
分离基物 Human
模式菌株 no
操作步骤 ①准备上述平板 1-2 块;②安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入平板中 200μL/个,涂布均匀;④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
检测原理:
一、核心遗传背景基础原理
单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)为革兰氏阳性兼性厌氧杆菌,基因组携带hlyA(溶血素)、inlA/inlB(内化素)等毒力基因簇,赋予其侵入宿主细胞并在胞内增殖的能力,遗传性状稳定,毒力基因高度保守,为分子检测提供稳定靶标。
二、菌株检测与鉴定核心原理
以选择性增菌与选择性平板分离,观察典型菌落并鉴定β-溶血,结合革兰氏染色及生化反应(CAMP试验、鼠李糖等)鉴定,再以hlyA等特异毒力基因分子扩增确证,实现"增菌分离—生化初筛—分子确认"的鉴定流程。
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冻干粉菌种复苏中注意事项:
1、冻干粉菌种长期保藏:未活化菌种置于-20℃低温环境储存。
2、冻干管使用要求:真空冻干封存菌种,开管后菌粉一次性用尽,禁止留存复用。
3、复苏接种要求:菌种以牛奶为保护剂、菌体含量低,复苏菌悬液需全部接种新鲜培养基。
4、培养时长说明:休眠菌种生长延滞期较长,未按时出菌可延长培养24h及以上。
5、菌种使用标准:初代复苏菌种活性不稳,需2次继代培养,活性稳定后方可实验。
6、操作资质与防护:仅限专业人员开管;三级危害菌种在生物安全柜操作,常规菌种在超净台操作,全程做好面部、眼部防护。
7、实验善后规范:全流程无菌操作,实验耗材、器皿经灭菌处理后销毁。
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