小鼠凝血因子VIIIa轻链(F8aLC)试剂盒
检测原理:
小鼠F8aLC ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(酶联免疫吸附检测技术)。其核心反应过程如下:
包被与结合:用纯化的小鼠F8aLC捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入样本(或标准品)和HRP(辣根过氧化物酶)标记的F8aLC检测抗体,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤与显色:经过充分洗涤后,加入底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
测定与计算:颜色的深浅与样品中的F8aLC浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样品中小鼠F8aLC的实际浓度。
产品名称:
小鼠凝血因子VIIIa轻链(F8aLC)试剂盒
英文名称:Mouse coagulation factor VIIIa light chain,F8aLC ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E032184
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
性能指标 常见参数范围
检测范围 跨度较大,例如:0.5 - 200 ng/mL
灵敏度 最低可达 0.27 ng/mL
精密度 (CV) 板内变异系数 < 10%,板间变异系数 < 12%
特异性 与其它相似物质无明显交叉反应
反应时间 通常在 1.5 - 3 小时左右
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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