小鼠LF/LTF ELISA试剂盒主要有两种检测原理,其中双抗体夹心法最为常见:
双抗体夹心法(Sandwich ELISA):
包被:将特异性的抗小鼠LTF抗体预先包被在酶标板表面。
结合:加入待测样本(如小鼠血清、血浆等),样本中的LTF抗原会与包被抗体特异性结合。
形成夹心:加入生物素标记或酶标记的抗小鼠LTF检测抗体,形成“包被抗体-抗原-检测抗体”的免疫复合物。
显色与定量:加入显色底物(如TMB),在酶催化下产生颜色反应(蓝色,加终止液后变黄)。颜色的深浅(OD450值)与样本中LTF的浓度呈正比,通过绘制标准曲线即可计算出样本中LTF的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白试剂盒 |
货号 |
LZ-E032137 |
| 英文名称 |
Mouse Lactoferrin,LTF/LF ELISA kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同厂家生产的试剂盒在性能指标上存在一定差异,以下数据综合了市面上几款主流的小鼠LTF ELISA试剂盒参数,供你参考:
性能指标 常见参数范围 备注
检测范围 31.25 - 2000 pg/mL;0.625 - 40 ng/mL;3.12 - 200 μg/mL 跨度较大,需根据样本预估浓度选择
灵敏度 15.2 pg/mL;0.241 ng/mL;1.0 ng/mL;3.12 μg/mL 夹心法通常灵敏度极高(pg级)
特异性 仅识别小鼠LTF,无明显交叉反应 对天然小鼠LTF具有高
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度