小鼠糖原磷酸化酶同工酶BBELISA试剂盒
检测原理:
小鼠GP-BB ELISA试剂盒普遍采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行定量检测,具体反应原理如下:
包被与结合:试剂盒的酶标包被板上预先包被了特异性识别小鼠GP-BB的捕获抗体。当加入标准品或待测样本时,样本中的GP-BB会与固相载体上的抗体特异性结合。
形成复合物:洗涤除去未结合的成分后,加入酶标记的检测抗体(通常为HRP标记,或生物素标记抗体与亲和素-酶复合物)。它会与已经结合在板上的GP-BB结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色反应:再次彻底洗涤后,加入显色底物(通常为TMB)。在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下,TMB转化为蓝色产物,加入终止液(酸性溶液)后变为黄色。
定量分析:颜色的深浅与样本中小鼠GP-BB的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中GP-BB的实际浓度。
产品名称:
小鼠糖原磷酸化酶同工酶BBELISA试剂盒
英文名称:Mouse Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E032064
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
检测范围(线性范围):跨度较大,常见的有 31.25 pg/mL 至 2000 pg/mL,也有部分试剂盒的范围在 15.6 pg/mL 至 1000 pg/mL,甚至部分高灵敏度试剂盒的检测范围在 0.312 ng/mL 至 20 ng/mL(即 312 pg/mL - 20000 pg/mL)。
灵敏度:能够检测到的最小浓度通常极低,一般在 < 10 pg/mL 左右,常规试剂盒的灵敏度通常在 0.06 ng/mL 至 1.0 pg/mL 之间。
特异性:试剂盒使用的抗体经过优化,
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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