小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠HA ELISA试剂盒的检测原理主要分为双抗体夹心法(Sandwich ELISA)和竞争法(Competitive ELISA)两种,具体取决于不同厂家的试剂盒设计:
双抗体夹心法(Sandwich ELISA):
包被与结合:试剂盒的酶标包被板上预先包被了特异性识别小鼠HA的捕获抗体。当加入标准品或待测样本时,样本中的HA会与固相载体上的抗体特异性结合。
形成复合物:洗涤除去未结合的成分后,加入酶标记的检测抗体(通常为HRP标记,或生物素标记抗体与亲和素-酶复合物)。它会与已经结合在板上的HA结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色与定量:再次彻底洗涤后,加入显色底物(通常为TMB)。在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下,TMB转化为蓝色产物,加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中小鼠HA的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中HA的实际浓度。
产品名称:
小鼠透明质酸(HA)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse Hyaluronic acid,HA ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E032056
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
检测范围(线性范围):跨度较大,常见的有 1.563 ng/mL 至 100 ng/mL,也有部分试剂盒的范围在 15.6 ng/mL 至 1000 ng/mL(即 15600 pg/mL - 1000000 pg/mL),甚至部分试剂盒的检测范围在 10 ng/mL 至 160 ng/mL。
灵敏度:能够检测到的最小浓度通常极低,一般在 < 1.0 ng/mL 左右,部分高灵敏度试剂盒可达到 < 0.938 ng/mL,常规试剂盒的灵敏度通常在 1.0 pg/mL 至 9.0 ng/mL 之间。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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