小鼠脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠DPD ELISA试剂盒主要分为双抗体夹心法(Sandwich ELISA)和竞争法(Competitive ELISA)两种,它们的显色原理与结果判定截然相反:
双抗体夹心法(Sandwich ELISA)
原理:用纯化的抗小鼠脱氧胶原吡啶交联(DPD)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体。往包被的微孔中依次加入小鼠DPD抗原(样本或标准品)和HRP(辣根过氧化物酶)标记的检测抗体,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”免疫复合物。
结果判定:加入底物TMB显色后,颜色的深浅和样品中的DPD含量呈正相关。
竞争法(Competitive ELISA)
原理:将DPD抗原或抗体包被于微孔板上。实验时,样本或标准品中的DPD与一定量的酶标记DPD(DPD-HRP标记物)竞争结合固相上的有限结合位点。
结果判定:样本中DPD浓度越高,结合在板上的酶标物就越少。因此,颜色的深浅和样品中的DPD含量呈反比(负相关)。
产品名称:
小鼠脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse deoxypyridinoline,DPD ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E032049
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
性能指标 参数参考范围/数值 说明
灵敏度 1.0 nmol/L 或 1.875 ng/mL 最低可检测剂量,不同试剂盒差异较大
检测范围 3.125 ~ 200 ng/mL 或 500 ~ 7.8 nmol/L 需根据样本实际浓度选择合适的试剂盒
准确性 相关系数 R ≥ 0.99 标准品线性回归与预期浓度的相关性
重复性 板内/板间变异系数(CV) < 8% ~ 12% 反映实验结果的稳定性和重现性
特异性 无显著交叉反应 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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