小鼠CT-1 ELISA试剂盒的检测原理主要分为双抗体夹心法(Sandwich ELISA)和竞争法(Competitive ELISA)两种,具体取决于不同厂家的试剂盒设计:
双抗体夹心法(Sandwich ELISA):
包被与结合:试剂盒的酶标包被板上预先包被了特异性识别小鼠CT-1的捕获抗体。当加入标准品或待测样本时,样本中的CT-1会与固相载体上的抗体特异性结合。
形成复合物:洗涤除去未结合的成分后,加入酶标记的检测抗体(通常为HRP标记,或生物素标记抗体与亲和素-酶复合物)。它会与已经结合在板上的CT-1结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色与定量:再次彻底洗涤后,加入显色底物(通常为TMB)。在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下,TMB转化为蓝色产物,加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中小鼠CT-1的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中CT-1的实际浓度。
竞争法(Competitive ELISA):
显色与定量:洗涤后加入底物显色。样本中CT-1的浓度越高,结合在板上的酶标记物就越少,显色就越浅。因此,颜色的深浅与样本中小鼠CT-1的浓度呈负相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中CT-1的实际浓度。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠心肌营养素1(CT-1)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E032004 |
| 英文名称 |
Mouse cardiotrophln 1,CT-1 ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
检测范围(线性范围):跨度较大,常见的有 15.6 pg/mL 至 1000 pg/mL(即 15.625 pg/mL - 1000 pg/mL),也有部分试剂盒的范围在 1.0 pg/mL 至 1000 pg/mL,甚至部分高灵敏度试剂盒的检测范围在 < 10 pg/mL。
灵敏度:能够检测到的最小浓度通常极低,一般在 1.0 pg/mL 至 10 pg/mL 左右,常规试剂盒的灵敏度通常在 < 10 pg/mL 上下,部分高灵敏度试剂盒可达到 < 1.0 pg/mL。
特异性:试剂盒使用的抗体经过优化
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度