小鼠血小板反应蛋白(TSP-1)试剂盒
检测原理:
1. 双抗体夹心法(Sandwich ELISA)
这是目前应用最广泛的检测原理。微孔板上预先包被了抗小鼠TSP-1的特异性捕获抗体。检测时,样本中的TSP-1抗原会先与包被抗体结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)或生物素标记的检测抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”免疫复合物。
结果判定:加入显色底物(通常为TMB)后,在酶催化下产生蓝色,加终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中TSP-1的浓度呈正相关。
2. 竞争法(Competitive ELISA)
部分试剂盒采用竞争法原理。样本中的TSP-1抗原与一定量的HRP标记的TSP-1抗原,共同竞争结合微孔板上有限的抗体结合位点。
结果判定:加入显色底物后,样本中TSP-1浓度越高,结合在微孔板上的酶标抗原就越少,显色越浅。因此,颜色的深浅与样本中TSP-1的浓度呈负相关(反比)。
产品名称:
小鼠血小板反应蛋白(TSP-1)试剂盒
英文名称:Mouse thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031963
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
检测范围:跨度极大,选购时需根据预估的样本浓度选择。
常见质量浓度范围(pg级):7.81 - 500 pg/mL、7.8 - 500 ng/mL(部分高敏试剂盒)。
常见质量浓度范围(μg级):15 - 350 μg/L(即 15 - 350 ng/mL)。
灵敏度:不同试剂盒的最低检测限差异明显。
特异性:具有高特异性,能够精准识别小鼠TSP-1,与小鼠体内其他结构类似的蛋白或可溶性类似物无显著交叉反应。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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