双抗体夹心法:这是目前最主流的检测原理。酶标板微孔中预先包被了能特异性捕获小鼠PAF的单克隆抗体。加入待测样本或标准品后,样本中的PAF会被固相抗体特异性结合。洗涤去除未结合的成分后,加入生物素标记的抗小鼠PAF检测抗体,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,形成“固相抗体-PAF-生物素化抗体-HRP”的夹心复合物。加入TMB底物显色后,颜色的深浅(在450nm波长下的OD值)与样本中PAF的浓度呈正比。
竞争性抑制法:部分试剂盒(如某些通用型品牌)采用此原理。酶标板微孔中预先包被了PAF单克隆抗体。加入待测样本或标准品后,样本中的游离PAF与一定量的生物素标记的PAF抗原,共同竞争结合固相载体上有限的抗体结合位点。样本中的PAF浓度越高,结合到固相上的生物素标记抗原就越少。显色后,颜色的深浅与样本中PAF的浓度呈反比。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠血小板活化因子(PAF)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031962 |
| 英文名称 |
Mouse platelet activating factor,PAF ELISA KIT |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
参数类别 性能指标/说明
灵敏度 跨度较大,通常在 0.47 - 1.0 ng/mL(或 < 1 mU/mL)左右。
检测范围 跨度极大,常见线性范围如 0.78 - 50 ng/mL、0.2 - 8 μg/L 或 1.56 - 100 mU/mL。
特异性 对小鼠PAF具有高度特异性,与小鼠其他细胞因子或结构类似物无显著交叉反应。
重复性 板内变异系数(CV)通常 < 10%,板间变异系数 < 12% - 15%,结果稳定可靠。
样本类型 适用于小鼠血清、血浆(EDTA/肝素/柠檬酸钠抗凝)
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度