小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)试剂盒
检测原理:
小鼠NADH ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行定量检测,具体反应原理如下:
包被与结合:试剂盒的酶标包被板上预先包被了特异性识别小鼠NADH的捕获抗体。当加入标准品或待测样本时,样本中的NADH会与固相载体上的抗体特异性结合。
形成复合物:洗涤除去未结合的成分后,加入酶标记的检测抗体(通常为HRP标记,或生物素标记抗体与亲和素-酶复合物)。它会与已经结合在板上的NADH结合,形成“固相抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
显色反应:再次彻底洗涤后,加入显色底物(通常为TMB)。在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下,TMB转化为蓝色产物,加入终止液(酸性溶液)后变为黄色。
定量分析:颜色的深浅与样本中小鼠NADH的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中NADH的实际浓度。
产品名称:
小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)试剂盒
英文名称:Mouse nicotinamide adenine dinucleotide,NADH ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031952
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
检测范围(线性范围):跨度较大,常见的有 31.25 pg/mL 至 1000 pg/mL,也有部分试剂盒的范围在 15.6 pg/mL 至 1000 pg/mL 等。
灵敏度:能够检测到的最小浓度通常极低,一般在 1.0 pg/mL 至 5.0 pg/mL 左右。
特异性:试剂盒使用的抗体经过优化,能特异性识别小鼠NADH,与其他可溶性结构类似物无明显交叉反应。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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