小鼠IDE ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行检测。具体原理如下:
包被与结合:用纯化的抗小鼠IDE抗体包被微孔板,制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入小鼠IDE抗原(样本或标准品)和生物素化的抗小鼠IDE抗体,形成“固相抗体-抗原-生物素化抗体”免疫复合物。
酶标与显色:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(或酶结合物),经过彻底洗涤后,加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
结果判定:颜色的深浅和样品中的胰岛素降解酶(IDE)含量呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样品浓度。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠胰岛素降解酶(IDE)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031937 |
| 英文名称 |
Mouse Insulin-degrading Enzyme,IDE ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
性能指标 参数参考范围/数值 说明
灵敏度 < 1.33 pg/mL ~ 0.064 ng/mL 最低可检测剂量,不同试剂盒差异较大
检测范围 3.125 ~ 200 pg/mL 或 0.156 ~ 10 ng/mL 需根据样本实际浓度选择合适的试剂盒
准确性 相关系数 R ≥ 0.99 标准品线性回归与预期浓度的相关性
重复性 板内/板间变异系数(CV) < 10% ~ 15% 反映实验结果的稳定性和重现性
特异性 无显著交叉反应 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
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| Human HABP2 ELISA Kit |
小鼠神经调节蛋白1(NRG1)ELISA试剂盒 |
人肿瘤蛋白p53(TP53)PCR试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。