小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4试剂盒
检测原理:
小鼠IGFBP-4 ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行检测。具体原理如下:
包被与结合:用纯化的抗小鼠IGFBP-4抗体包被微孔板,制成固相抗体。往包被单抗的微孔中依次加入小鼠IGFBP-4抗原(样本或标准品)和生物素化的抗小鼠IGFBP-4抗体,形成“固相抗体-抗原-生物素化抗体”免疫复合物。
酶标与显色:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素,经过彻底洗涤后,加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
结果判定:颜色的深浅和样品中的胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)含量呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样品浓度。
产品名称:
小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4试剂盒
英文名称:Mouse Insulin-like growth factor binding protein 4,IGFBP-4 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031929
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
性能指标 参数参考范围/数值 说明
灵敏度 < 0.27 ng/mL ~ 0.62 ng/mL 最低可检测剂量,不同试剂盒差异较大
检测范围 0.625 ~ 100 ng/mL 需根据样本实际浓度选择合适的试剂盒
准确性 相关系数 R ≥ 0.99 标准品线性回归与预期浓度的相关性
重复性 板内/板间变异系数(CV) < 10% ~ 12% 反映实验结果的稳定性和重现性
特异性 无显著交叉反应 不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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