夹心法(Sandwich ELISA):这是较为常见的检测原理。酶标板微孔中预先包被了特异性抗原(胰岛素)。当加入小鼠血清或血浆样本时,样本中的IAA会与包被的胰岛素抗原结合。随后加入酶标记(如HRP)的抗小鼠免疫球蛋白抗体,形成“包被抗原-IAA-酶标二抗”的夹心复合物。加入TMB底物显色后,颜色的深浅(450nm波长下的OD值)与样本中IAA的浓度呈正比。
竞争性抑制法(Competitive ELISA):部分试剂盒采用此原理。样本中的IAA与一定量的酶标记IAA(或标记抗原)竞争结合固相载体上有限的结合位点。样本中的IAA浓度越高,结合到固相上的酶标记物就越少。显色后,颜色的深浅与样本中IAA的浓度呈反比。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031926 |
| 英文名称 |
Mouse insulin autoantibodies,IAA ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
参数类别 性能指标/说明
灵敏度 通常在 0.3 - 1.2 ng/mL 左右,部分高灵敏试剂盒可达更低水平。
检测范围 常见线性定量范围如 0.78 - 50 ng/mL 或 3.12 - 200 ng/mL。
特异性 对小鼠IAA具有高度特异性,与结构类似物无显著交叉反应。
重复性 板内变异系数(CV)通常 < 10%,板间变异系数 < 12% - 15%,结果稳定。
样本类型 适用于小鼠血清、血浆(EDTA/肝素抗凝)、组织匀浆及其他生物液体。
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度