小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)试剂盒
检测原理:
小鼠GLP-1 ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。其核心反应流程如下:
包被与捕获:酶标板微孔中预先包被了能特异性识别小鼠GLP-1的捕获抗体。加入待测样本(如血浆)或标准品后,样本中的GLP-1会被固相抗体捕获。
形成免疫复合物:洗涤去除未结合成分后,加入生物素标记的检测抗体。该抗体与已结合的GLP-1发生特异性结合,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素,形成“固相抗体-GLP-1-生物素化抗体-HRP”的夹心复合物。
显色与测定:再次洗涤后加入TMB底物溶液,HRP催化TMB产生蓝色产物。加入终止液(通常为酸性溶液)后,溶液变为黄色。颜色的深浅(在450nm波长下测得的吸光度OD值)与样本中GLP-1的浓度呈正比,通过标准曲线即可定量计算出GLP-1的含量。
注:除了常规的显色法,市面上也有采用化学发光法(Chemiluminescent)的高灵敏度GLP-1检测试剂盒。
产品名称:
小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)试剂盒
英文名称:Mouse glucagon-like peptide-1,GLP-1 ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031922
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
参数类别 性能指标/说明
检测目标 分为总GLP-1(包含活性与非活性形式)和活性GLP-1(仅检测7-36/37酰胺形式)。
灵敏度 极高,通常在 0.1 - 5 pg/mL(或 0.1 - 2 pmol/L)级别,能捕捉生理状态下的微量变化。
检测范围 常见线性范围为 0.3 - 100 pg/mL 或 1 - 80 pmol/L,不同品牌跨度较大。
样本类型 EDTA抗凝血浆(严禁使用血清,原因见下文)及细胞培养上清。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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