1. 双抗体夹心法(Sandwich ELISA)
这是最常见的检测原理。微孔板上预先包被了抗小鼠胰脂肪酶的特异性抗体。检测时,样本中的胰脂肪酶抗原会先与包被抗体结合,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
结果判定:加入显色底物(TMB)后,颜色的深浅与样本中胰脂肪酶的浓度呈正相关。
2. 竞争法(Competitive ELISA)
部分试剂盒采用竞争法原理。样本中的胰脂肪酶抗原与一定量的HRP标记的胰脂肪酶抗原,共同竞争结合微孔板上有限的抗体结合位点。
结果判定:加入显色底物后,样本中胰脂肪酶浓度越高,结合在微孔板上的酶标抗原就越少,显色越浅。因此,颜色的深浅与样本中胰脂肪酶的浓度呈负相关(反比)。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠胰脂肪酶(PL)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031919 |
| 英文名称 |
Mouse Pancreatic Lipase,PL ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
检测范围:跨度极大,常见范围包括:
以活性单位计:5 - 200 U/L
以质量浓度计:15.6 - 1000 pg/mL 或 0.79 - 50 ng/mL
灵敏度:通常在 1.0 U/L 或 < 5 pg/mL 级别。
特异性:具有高度特异性,仅识别小鼠胰脂肪酶,不与其它物种或结构类似物发生交叉反应。
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
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小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)ELISA试剂盒 |
人酯酰甘油激酶ζ(DGKZ)PCR试剂盒 |
注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。