小鼠乙酰辅酶A ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠乙酰辅酶A ELISA试剂盒通常采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。具体反应过程如下:
包被与结合:微孔板上预先包被了乙酰辅酶A的特异性抗体。在检测时,往微孔中依次加入待测样本(或标准品)以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体。样本中的乙酰辅酶A会与包被抗体及标记抗体结合,形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物。
洗涤:经过温育后,通过彻底洗涤去除未结合的其他游离物质。
显色:加入显色底物(通常为TMB)。TMB在辣根过氧化物酶(HRP)的催化下转化成蓝色,随后在酸的作用下转化成最终的黄色。
测定:颜色的深浅与样本中的乙酰辅酶A浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中乙酰辅酶A的实际浓度。
产品名称:
小鼠乙酰辅酶A ELISA试剂盒
英文名称:mouse acetyl-CoA ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031915
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
检测范围:常见范围如 0.32 - 20 nmol/mL 或 0.78 - 50 ng/mL。
灵敏度:通常小于 0.2 ng/mL(或 < 0.195 ng/mL / < 0.116 nmol/mL),能够检测出极低浓度的目标分子。
特异性:具有高特异性,不与其它结构类似的细胞因子或可溶性类似物发生交叉反应。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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