小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠FFA ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。具体反应过程如下:
包被捕获:酶标板的微孔中预先包被了能特异性结合小鼠游离脂肪酸(FFA)的捕获抗体。
抗原结合:加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等),样本中的FFA抗原会被微孔板上的捕获抗体特异性结合。
形成复合物:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体,它会与已经被捕获的FFA抗原结合,从而形成“捕获抗体 - FFA抗原 - 酶标抗体”的免疫复合物。
显色与定量:洗去未结合的物质后,加入TMB底物显色液。在HRP的催化下,无色的TMB会变成蓝色,加入酸性终止液后溶液变为黄色。颜色的深浅与样本中FFA的浓度呈正相关,最后使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中FFA的准确浓度。
产品名称:
小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse free fatty acids,FFA ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031899
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
由于不同厂家的试剂盒在抗体配对和生产工艺上有所不同,其性能参数会存在一定范围的差异。以下是综合多个品牌试剂盒的常见参数范围:
检测范围:跨度较大,通常在 25 μmol/L - 800 μmol/L 之间,部分试剂盒的检测范围可达 0 - 1000 μg/mL。
灵敏度:即最小可检测浓度,具体数值因试剂盒而异,一般在 μmol/L 级别。
特异性:对小鼠FFA具有高度特异性,不与其它可溶性结构类似物发生交叉反应。
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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