小鼠载脂蛋白B(APOB)ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠APOB ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。其具体反应过程如下:
包被与结合:酶标板上预先包被了能特异性识别小鼠APOB的捕获抗体。将待测样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等)加入微孔中,样本中的APOB会与包被抗体特异性结合。
形成夹心结构:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的检测抗体,它会与已结合的APOB再次结合。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(或亲和素),形成“包被抗体 - APOB - 生物素标记抗体 - HRP”的免疫复合物。
显色与检测:彻底洗涤后,加入底物TMB(四甲基联苯胺)进行显色。TMB在HRP的催化下转化为蓝色,加入终止液(通常为硫酸)后变为黄色。
结果判定:颜色的深浅与样本中小鼠APOB的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过与标准曲线对比,即可计算出样本中APOB的浓度。
产品名称:
小鼠载脂蛋白B(APOB)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse Apolipoprotein B-100,APOB ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031892
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
参数指标 常见参考范围 说明
检测范围 1.56 - 200 ng/mL 不同品牌跨度较大(如1.56-100 ng/mL、3.125-200 ng/mL等),需根据样本预估浓度选择
灵敏度 约 1.22 - 196 pg/mL (0.00122 - 0.196 ng/mL) 最低可检测出的APOB浓度,通常在pg或ng级别
特异性 极高 仅特异性识别小鼠天然APOB(包括Apo B-100和Apo B-48),无明显交叉反应
精密度 (CV) 板内 < 10%,板间 < 12%
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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