小鼠Lp-α ELISA试剂盒主要采用双抗体一步夹心法(Sandwich ELISA)进行定量检测。具体步骤如下:
包被与捕获:微孔板上预先包被有特异性的Lp-α捕获抗体(通常为单克隆抗体)。当加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等)时,样本中的Lp-α抗原会被抗体特异性结合并固定在孔板上。
结合检测抗体:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体(通常为多克隆抗体),它会与已经被捕获的Lp-α抗原结合,形成“捕获抗体-抗原-HRP标记检测抗体”的夹心复合物。
酶促显色:洗涤去除未结合的物质后,加入TMB显色底物。HRP催化TMB底物产生蓝色产物。
终止与读数:加入酸性终止液使反应停止,溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中Lp-α的浓度成正比,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线即可计算出样本中目标蛋白的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031877 |
| 英文名称 |
Mouse lipoprotein α,Lp-α ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
性能指标 典型参数范围 备注
检测范围 3.13 - 200 ng/mL 或 12.5 - 400 μg/mL 跨度较大,具体取决于试剂盒设计
灵敏度 0.06 - 1.48 ng/mL 能够检测到的最低浓度
精密度 (CV) 批内差 < 8-10%;批间差 < 10-15% 反映实验的稳定性和重复性
适用样本 血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等 样本兼容性较广
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐,对操作要求高
流程长:典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤,耗时较长(通常需要3-5小时甚至过夜)。
洗涤关键:洗涤步骤至关重要,洗板不彻底会导致背景值过高(假阳性),洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect):当样本中目标抗原浓度极高时,可能会饱和捕获抗体和检测抗体,导致信号反而下降,出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰:样本中的杂质(如溶血、脂血、类风湿因子等)可能会干扰抗原抗体结合,导致结果偏差。
交叉反应:虽然特异性较高,但如果抗体质量不佳,仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量,信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原,无法提供关于抗原的生物活性(是否具有功能)或结构完整性的信息。例如,变性的蛋白可能仍能被ELISA检测,但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本:高质量的抗体(尤其是配对良好的单抗)制备工艺复杂,导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性:酶标记物对温度和环境敏感,若保存不当容易失活,影响实验结果。
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注意事项
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。