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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
产品属性
| 产品名称 | 小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)试剂盒 | 货号 | LZ-E031870 |
| 英文名称 | Mouse neutrophil elastase,NE ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
检测原理
小鼠NE ELISA试剂盒普遍采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）进行定量检测，其核心反应步骤如下：
包被与捕获：酶标板的微孔中预先包被了特异性的抗小鼠NE捕获抗体。当加入待测样本（如血清、血浆、组织匀浆等）时，样本中的NE会被固相抗体特异性捕获。
一抗结合：加入生物素标记的抗小鼠NE检测抗体，该抗体与已被捕获的NE结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体”的夹心复合物。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会与生物素发生高强度的特异性结合，从而使HRP连接到免疫复合物上。
显色与检测：加入TMB显色底物，HRP催化无色的TMB转变为蓝色。随后加入终止液（通常为酸性溶液），反应终止并转变为黄色。
结果计算：颜色反应的深浅（吸光度OD值，通常在450nm波长下测定）与样本中NE的浓度成正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中NE的具体浓度。
(注：市面上也有部分品牌如Abcam推出了“单洗涤”的改良夹心法试剂盒，可以将实验操作时间缩短至90分钟左右，但核心的抗原抗体夹心反应原理不变。)
不同厂家的试剂盒在抗体配对和工艺上存在差异，以下是基于市面常见产品的参数参考：
灵敏度（Sensitivity）：跨度较大，通常在 0.06 ng/mL 到 1.0 ng/mL 之间。部分高灵敏度试剂盒可达 0.027 ng/mL（即 27 pg/mL），甚至有磁珠荧光检测法可达到 < 0.003 ng/mL 的超高灵敏度。
检测范围（Detection Range）：常见的范围包括 0.156 - 10 ng/mL、0.312 - 20 ng/mL、1.56 - 100 ng/mL，
常见规格与保存
ELISA试剂盒实验
包被与捕获：酶标板的微孔中预先包被了特异性的抗小鼠NE捕获抗体。当加入待测样本（如血清、血浆、组织匀浆等）时，样本中的NE会被固相抗体特异性捕获。
一抗结合：加入生物素标记的抗小鼠NE检测抗体，该抗体与已被捕获的NE结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体”的夹心复合物。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会与生物素发生高强度的特异性结合，从而使HRP连接到免疫复合物上。
显色与检测：加入TMB显色底物，HRP催化无色的TMB转变为蓝色。随后加入终止液（通常为酸性溶液），反应终止并转变为黄色。
结果计算：颜色反应的深浅（吸光度OD值，通常在450nm波长下测定）与样本中NE的浓度成正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中NE的具体浓度。
(注：市面上也有部分品牌如Abcam推出了“单洗涤”的改良夹心法试剂盒，可以将实验操作时间缩短至90分钟左右，但核心的抗原抗体夹心反应原理不变。)
主要产品性能
灵敏度（Sensitivity）：跨度较大，通常在 0.06 ng/mL 到 1.0 ng/mL 之间。部分高灵敏度试剂盒可达 0.027 ng/mL（即 27 pg/mL），甚至有磁珠荧光检测法可达到 < 0.003 ng/mL 的超高灵敏度。
检测范围（Detection Range）：常见的范围包括 0.156 - 10 ng/mL、0.312 - 20 ng/mL、1.56 - 100 ng/mL，
常见规格与保存
产品规格：常见的有48T和96T两种规格，分别可进行48个或96个样本的检测。
样本类型：适用于血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆等。
保存条件：通常在2-8℃条件下避光保存。
有效期：一般为6个月。
ELISA试剂盒的显著优势
1. 极高的灵敏度与特异性
这是ELISA最核心的竞争力。
高灵敏度：得益于酶催化底物的信号放大作用，ELISA能检测到低浓度甚至皮克级（pg/mL）的目标分子。这对于检测血清中微量的细胞因子、激素或早期疾病标志物至关重要。
高特异性：特别是双抗体夹心法（最常用的方法），利用捕获抗体和检测抗体双重识别抗原的不同表位，极大降低了非特异性结合和交叉反应的风险，确保结果的准确性。
2. 高通量与高效率
批量处理：标准的ELISA板通常是96孔或384孔格式，非常适合同时处理大量样本（如大规模筛查）。
自动化兼容：操作流程标准化，极易与自动洗板机、酶标仪等设备配合，减少人为误差，显著提升实验效率。
3. 样本适用性广且无需复杂纯化
多样本类型：可以直接检测血清、血浆、尿液、细胞培养上清液、组织裂解液等多种复杂样本，通常不需要预先纯化抗原。
定量分析：通过标准曲线，可以精确计算样本中目标分子的浓度，提供定量的生物学数据。
4. 安全且成本相对可控
安全性：与放射免疫分析法（RIA）不同，ELISA使用酶标记而非放射性同位素，避免了辐射危害，试剂处理更安全。
设备门槛低：除了酶标仪外，不需要昂贵的大型精密仪器（如流式细胞仪或质谱仪），普通实验室即可开展。
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ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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