小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒
检测原理:
小鼠TNF-α ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法(Sandwich ELISA)。具体反应过程如下:
包被捕获:酶标板的微孔中预先包被了能特异性结合小鼠TNF-α的捕获抗体(单克隆或多克隆抗体)。
抗原结合:加入待测样本(如血清、血浆、细胞培养上清等),样本中的TNF-α抗原会被微孔板上的捕获抗体特异性结合。
形成复合物:加入生物素化的检测抗体,它会与已经被捕获的TNF-α抗原的另一个表位结合。随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin),生物素与链霉亲和素高强度结合,从而形成“捕获抗体 - TNF-α抗原 - 生物素化抗体 - HRP-链霉亲和素”的免疫复合物。
显色与定量:洗去未结合的物质后,加入TMB底物显色液。在HRP的催化下,无色的TMB会变成蓝色,加入酸性终止液后溶液变为黄色。颜色的深浅与样本中TNF-α的浓度呈正相关,最后使用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度(OD值),通过绘制标准曲线即可计算出样本中TNF-α的准确浓度。
产品名称:
小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒
英文名称:Mouse Tumor necrosis factor α,TNF-α ELISA KIT
规格:48T/96T
货号:LZ-E031867
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
由于不同厂家的试剂盒在抗体配对和生产工艺上有所不同,其性能参数会存在一定范围的差异。以下是综合多个主流品牌试剂盒的常见参数范围:
检测范围:跨度较大,通常在 3 pg/mL - 3000 pg/mL 之间。例如,常见范围有 7.8-500 pg/mL、15.6-1000 pg/mL,部分高量程试剂盒可达 46.88-3000 pg/mL。
灵敏度:即最小可检测浓度,一般在 0.5 pg/mL - 10 pg/mL 左右。部分高灵敏度试剂盒可达 1.0 pg/mL 甚至更低(如 <0.51 pg/mL)
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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