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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
小鼠TNF-α ELISA试剂盒普遍采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）进行定量检测，其核心反应步骤如下：
包被与捕获：酶标板的微孔中预先包被了特异性的抗小鼠TNF-α捕获抗体。当加入待测样本（如血清、血浆、细胞培养上清等）时，样本中的TNF-α会被固相抗体特异性捕获。
一抗结合：加入生物素标记的抗小鼠TNF-α检测抗体，该抗体与已被捕获的TNF-α结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体”的夹心复合物。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会与生物素发生高强度的特异性结合，从而使HRP连接到免疫复合物上。
显色与检测：加入TMB显色底物，HRP催化无色的TMB转变为蓝色。随后加入终止液（通常为酸性溶液），反应终止并转变为黄色。
结果计算：颜色反应的深浅（吸光度OD值，通常在450nm波长下测定）与样本中TNF-α的浓度成正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中TNF-α的具体浓度。
(注：市面上也有部分品牌采用“一步法”或“单洗涤”的改良夹心法，可以显著缩短实验操作时间，但核心的抗原抗体夹心反应原理不变。)
产品属性
主要产品性能
不同厂家的试剂盒在抗体配对和工艺上存在差异，以下是基于市面常见产品的参数参考：
灵敏度（Sensitivity）：跨度较大，通常在 1.0 pg/mL 到 10 pg/mL 之间，部分高灵敏度试剂盒可达 < 1.0 pg/mL（例如 1.0 pg/mL、4.69 pg/mL、9.1 pg/mL）。
检测范围（Detection Range）：常见的范围包括 7.8 - 500 pg/mL、31.25 - 2000 pg/mL，也有部分试剂盒的检测范围在 46.88 - 3000 pg/mL。
包被与捕获：酶标板的微孔中预先包被了特异性的抗小鼠TNF-α捕获抗体。当加入待测样本（如血清、血浆、细胞培养上清等）时，样本中的TNF-α会被固相抗体特异性捕获。
一抗结合：加入生物素标记的抗小鼠TNF-α检测抗体，该抗体与已被捕获的TNF-α结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体”的夹心复合物。
酶标结合：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会与生物素发生高强度的特异性结合，从而使HRP连接到免疫复合物上。
显色与检测：加入TMB显色底物，HRP催化无色的TMB转变为蓝色。随后加入终止液（通常为酸性溶液），反应终止并转变为黄色。
结果计算：颜色反应的深浅（吸光度OD值，通常在450nm波长下测定）与样本中TNF-α的浓度成正相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中TNF-α的具体浓度。
(注：市面上也有部分品牌采用“一步法”或“单洗涤”的改良夹心法，可以显著缩短实验操作时间，但核心的抗原抗体夹心反应原理不变。)
产品属性
| 产品名称 | 小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体试剂盒 | 货号 | LZ-E031866 |
| 英文名称 | Mouse tumor necrosis factor α(TNF-α)antibody ELISA Kit | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
灵敏度（Sensitivity）：跨度较大，通常在 1.0 pg/mL 到 10 pg/mL 之间，部分高灵敏度试剂盒可达 < 1.0 pg/mL（例如 1.0 pg/mL、4.69 pg/mL、9.1 pg/mL）。
检测范围（Detection Range）：常见的范围包括 7.8 - 500 pg/mL、31.25 - 2000 pg/mL，也有部分试剂盒的检测范围在 46.88 - 3000 pg/mL。
ELISA试剂盒实验
第一阶段：准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温：从冰箱取出试剂盒，将所有试剂（包括浓缩洗涤液、标准品、样本等）在室温（20-25℃）下平衡至少 30分钟。
注意：如果浓缩洗涤液有结晶，需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释：按照说明书要求，使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释（通常做7-8个浓度点），现配现用。
样本处理：确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀（如有沉淀需再次离心）。
第二阶段：加样与孵育
加样：
在酶标板的对应孔中，分别加入 100 µL（具体体积看说明书）稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔（只加稀释液）。
建议：每个样本做2-3个复孔，数据更可靠。
孵育：
盖上封板膜，放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时（或按说明书要求，如室温2小时）。
原理：让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段：洗板与检测抗体
洗板（关键步骤）：
弃去孔内液体，每孔加满洗涤液（约300-350 µL），静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干，确保无残留液体。
加检测抗体：
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液（生物素化抗体）。
盖上封板膜，37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物，不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度
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