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| 销售商： 上海联祖生物科技有限公司 | 查看该公司所有产品 >> |
检测原理
小鼠TNF-β ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）进行定量检测。具体步骤如下：
包被与捕获：微孔板上预先包被有特异性的TNF-β捕获抗体。当加入待测样本时，样本中的TNF-β抗原会被抗体特异性地结合并固定在孔板上。
结合检测抗体：加入生物素标记的检测抗体，它会与已经被捕获的TNF-β抗原结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素标记检测抗体”的夹心复合物。
酶促显色：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素（或链霉亲和素），HRP与生物素紧密结合。洗涤去除未结合的物质后，加入TMB显色底物。HRP催化TMB底物产生蓝色产物。
终止与读数：加入酸性终止液使反应停止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中TNF-β的浓度成正比，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算出样本中目标蛋白的浓度。
产品属性
主要产品性能
包被与捕获：微孔板上预先包被有特异性的TNF-β捕获抗体。当加入待测样本时，样本中的TNF-β抗原会被抗体特异性地结合并固定在孔板上。
结合检测抗体：加入生物素标记的检测抗体，它会与已经被捕获的TNF-β抗原结合，形成“捕获抗体-抗原-生物素标记检测抗体”的夹心复合物。
酶促显色：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素（或链霉亲和素），HRP与生物素紧密结合。洗涤去除未结合的物质后，加入TMB显色底物。HRP催化TMB底物产生蓝色产物。
终止与读数：加入酸性终止液使反应停止，溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中TNF-β的浓度成正比，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算出样本中目标蛋白的浓度。
产品属性
| 产品名称 | 小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)试剂盒 | 货号 | LZ-E031865 |
| 英文名称 | Mouse Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA KIT | 规格 | 48T/96T |
| 用途 | 仅供科研实验 | 品牌 | 联祖 |
主要产品性能
性能指标 典型参数范围 备注
检测范围 15.6 - 1000 pg/mL 或 18.75 - 1200 pg/mL 具体取决于试剂盒的灵敏度设计
灵敏度 2.9 - 15 pg/mL 能够检测到的最低浓度
精密度 (CV) 批内差 < 8-10%；批间差 < 10-12% 反映实验的稳定性和重复性
适用样本 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等 部分试剂盒也支持细胞裂解液
特异性 仅识别小鼠源性TNF-β 与其他类似物无显著交叉反应
ELISA试剂盒的局限性与缺点
检测范围 15.6 - 1000 pg/mL 或 18.75 - 1200 pg/mL 具体取决于试剂盒的灵敏度设计
灵敏度 2.9 - 15 pg/mL 能够检测到的最低浓度
精密度 (CV) 批内差 < 8-10%；批间差 < 10-12% 反映实验的稳定性和重复性
适用样本 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等 部分试剂盒也支持细胞裂解液
特异性 仅识别小鼠源性TNF-β 与其他类似物无显著交叉反应
ELISA试剂盒的局限性与缺点
1. 操作步骤繁琐，对操作要求高
流程长：典型的ELISA实验涉及加样、多次孵育、多次洗涤、显色、终止等步骤，耗时较长（通常需要3-5小时甚至过夜）。
洗涤关键：洗涤步骤至关重要，洗板不彻底会导致背景值过高（假阳性），洗板过度或干涸则影响灵敏度。这对操作人员的细心程度有一定要求。
2. 易受干扰与“钩状效应”
钩状效应 (Hook Effect)：当样本中目标抗原浓度极高时，可能会饱和捕获抗体和检测抗体，导致信号反而下降，出现假阴性结果。这需要对高浓度样本进行稀释复测。
基质干扰：样本中的杂质（如溶血、脂血、类风湿因子等）可能会干扰抗原抗体结合，导致结果偏差。
交叉反应：虽然特异性较高，但如果抗体质量不佳，仍可能与结构相似的分子发生交叉反应。
3. 仅检测抗原含量，信息有限
ELISA只能告诉你“有多少”抗原，无法提供关于抗原的生物活性（是否具有功能）或结构完整性的信息。例如，变性的蛋白可能仍能被ELISA检测，但已失去生物活性。
4. 试剂成本与稳定性
试剂成本：高质量的抗体（尤其是配对良好的单抗）制备工艺复杂，导致试剂盒成本相对较高。
酶的不稳定性：酶标记物对温度和环境敏感，若保存不当容易失活，影响实验结果。
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注意事项
样本要求：溶血的标本会影响检测结果，不宜使用。待测样本应尽早检测，如需保存，应在-20℃或-80℃冷冻，并避免反复冻融。
试剂准备：使用前需将所有试剂置于室温（20-25℃）平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出，需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范：
为避免交叉污染，添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色，若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要，无论是手动还是自动洗板，都应确保洗涤充分，并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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