小鼠组蛋白脱乙酰酶(HDAC1)ELISA试剂盒
检测原理:
小鼠HDAC1 ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法进行检测。具体反应过程如下:
固相包被:试剂盒中的酶标板预先包被了能特异性结合小鼠HDAC1的捕获抗体,形成固相载体。
抗原结合:向微孔中加入待测样本(或标准品),样本中的HDAC1抗原会与包被抗体特异性结合。
形成夹心:加入生物素化的抗小鼠HDAC1检测抗体,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素。生物素与链霉亲和素的高亲和力结合,最终形成“固相抗体-抗原-生物素化抗体-HRP-链霉亲和素”的免疫复合物(即“夹心”结构)。
显色与读数:经过洗涤去除未结合的成分后,加入显色底物(如TMB)。在HRP的催化下,底物发生显色反应(通常变为蓝色,加入终止液后变为黄色)。颜色的深浅与样本中HDAC1的浓度成正比,最后使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线即可计算出样本中HDAC1的浓度。
产品名称:
小鼠组蛋白脱乙酰酶(HDAC1)ELISA试剂盒
英文名称:Mouse histone deacetylase 1,HDAC1 ELISA kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031844
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
性能指标 参数范围 / 典型值 备注说明
检测类型 夹心法 (Sandwich) 专为小鼠HDAC1设计,特异性强
灵敏度 0.059 ng/mL ~ 0.21 ng/mL 不同试剂盒差异较大,部分高敏试剂盒可达pg级
检测范围 0.156 ng/mL ~ 50 ng/mL 需根据样本实际浓度选择合适的试剂盒
样本类型 血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆、细胞裂解液等 绝大多数体液及组织样本均适用
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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