人 TNFRSF1B ELISA试剂盒
检测原理:
人TNFRSF1B ELISA试剂盒主要采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA),其核心反应过程如下:
包被与结合:将特异性的肿瘤坏死因子受体超家族成员1B(TNFRSF1B)捕获抗体预先包被在96孔微孔板上。向微孔中分别加入标准品或待测样本,样本中的TNFRSF1B会与固相载体上的抗体发生特异性结合。
形成夹心:洗涤去除未结合的物质后,加入生物素化的TNFRSF1B检测抗体,使其与已结合的TNFRSF1B再次结合,形成“捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体”的免疫复合物。
酶联与显色:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(或链霉亲和素)。随后加入TMB底物进行显色,TMB在HRP的催化下产生蓝色产物,在酸性终止液的作用下最终转化为黄色。
结果计算:颜色的深浅与样本中肿瘤坏死因子受体超家族成员1B(TNFRSF1B)的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),通过绘制的标准曲线即可计算出样本中TNFRSF1B的准确浓度。
产品名称:
人 TNFRSF1B ELISA试剂盒
英文名称:Human Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1B(TNFRSF1B)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031496
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
其他核心性能指标:
特异性:与天然的人TNFRSF1B具有高特异性和优异的敏感性,与结构类似物之间未观察到显著的交叉反应或干扰。
精密度(重复性):
批内差(板内变异系数 CV):通常 < 8% - 10%
批间差(板间变异系数 CV):通常 < 10% - 12%
适用物种:人(Homo sapiens)。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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