人中性鞘磷脂酶(NSMASE)ELISA试剂盒
检测原理:
人NSMASE ELISA试剂盒通常采用双抗体夹心法进行检测。具体反应过程如下:
包被与捕获:微孔板上预先包被了能特异性结合NSMASE的捕获抗体。当加入样本或标准品后,样本中的NSMASE会与固相载体上的抗体结合。
形成夹心复合物:加入生物素标记的NSMASE检测抗体,它与已被捕获的NSMASE结合,形成“抗体-抗原-生物素化抗体”的免疫复合物。
酶结合与显色:洗涤去除未结合的物质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素。亲和素与生物素具有极高的亲和力,从而将HRP结合到复合物上。随后加入TMB底物,HRP催化TMB产生蓝色产物。
终止与读数:加入酸性终止液终止反应,溶液颜色由蓝变黄。颜色的深浅与样本中NSMASE的浓度呈正相关,使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(O.D.值),即可计算出样本中NSMASE的浓度。
产品名称:
人中性鞘磷脂酶(NSMASE)ELISA试剂盒
英文名称:Human Neutral Sphingomyelinase(NSMASE)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031485
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌或批次的试剂盒性能参数会存在一定差异,以下是市面上常见的人NSMASE ELISA试剂盒的典型性能指标:
检测范围:
常见范围:约 0.16 - 10 ng/mL
其他范围:约 0.02 - 4.5 ng/mL(即 20 - 4500 ng/L)
灵敏度:
通常在 0.067 ng/mL(即 67 pg/mL)左右。
特异性:对天然存在的人源NSMASE具有高度特异性,与其他相似物质(如酸性鞘磷脂酶ASM)无明显交叉反应。
适用样本类型:
该试剂盒适用于多种生物样本,主要包括:
血清
血浆(如EDTA、肝素抗凝)
细胞培养上清液
组织匀浆
细胞裂解液
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
样本要求:溶血的标本会影响检测结果,不宜使用。待测样本应尽早检测,如需保存,应在-20℃或-80℃冷冻,并避免反复冻融。
试剂准备:使用前需将所有试剂置于室温(20-25℃)平衡。浓缩洗涤液若有晶体析出,需在37℃下加热至完全溶解后再稀释使用。
操作规范:
为避免交叉污染,添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
底物显色液应呈无色或很浅的颜色,若已变蓝则不能使用。
洗板步骤对结果准确性至关重要,无论是手动还是自动洗板,都应确保洗涤充分,并避免微孔在温育过程中干燥。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或其散发的强烈气体。
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