人脂素3(LPIN3)ELISA试剂盒
检测原理:
人PLIN3 ELISA试剂盒通常采用经典的双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行定量检测。其具体反应流程如下:
包被与捕获:试剂盒的微孔板中预先包被了能特异性识别PLIN3的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清、细胞裂解液等)后,样本中的PLIN3抗原会被孔底的抗体特异性捕获。
形成夹心复合物:洗去未结合的杂质后,加入生物素标记的抗人PLIN3检测抗体,使其与已被捕获的抗原结合,形成“捕获抗体 - PLIN3抗原 - 生物素化检测抗体”的免疫复合物。
酶联与显色:随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(或链霉亲和素),亲和素会与检测抗体上的生物素发生高亲和力的结合。最后加入TMB显色底物,在HRP的催化下,底物发生显色反应(通常变为蓝色)。
终止与定量:加入酸性终止液(如硫酸)终止反应,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中PLIN3的浓度与OD值在一定范围内呈正相关,通过绘制标准曲线即可计算出样本中PLIN3的精确浓度。
产品名称:
人脂素3(LPIN3)ELISA试剂盒
英文名称:Human Lipin 3(LPIN3)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031454
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
灵敏度 (Sensitivity):指试剂盒能检测到的最低浓度。通常在 0.057 ng/mL 左右(部分高敏试剂盒可能更低)。
检测范围 (Assay Range):指试剂盒能准确定量的浓度区间。市面上绝大多数PLIN3试剂盒的检测范围非常统一,通常为 0.156 - 10 ng/mL。如果样本浓度超出该范围,需用样本稀释液适当稀释后复测。
特异性 (Specificity):优质的试剂盒对人源天然或重组的PLIN3具有高度特异性,与其他结构相似的蛋白或细胞因子无显著交叉反应。
检测流程简要:
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书a要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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注意事项:
标准曲线:每次实验都必须重新制作标准曲线,不可沿用旧数据。
洗涤步骤:洗涤不充分是导致误差的主要原因,需严格按照说明书洗板(通常3-5次)。
用途限制:此类试剂盒通常仅供科研使用,不可用于临床诊断
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