人脂肪酶H(LIPH)ELISA试剂盒通常采用经典的双抗体夹心法(Sandwich ELISA)进行定量检测。其具体反应流程如下:
包被与捕获:试剂盒的微孔板中预先包被了能特异性识别LIPH的捕获抗体。加入待测样本(如血清、血浆或细胞培养上清液)后,样本中的LIPH抗原会被孔底的抗体特异性捕获。
形成夹心复合物:洗去未结合的杂质后,加入生物素标记的抗人LIPH检测抗体,使其与已被捕获的抗原结合,形成“捕获抗体 - LIPH抗原 - 生物素化检测抗体”的免疫复合物。
酶联与显色:随后加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(或链霉亲和素),亲和素会与检测抗体上的生物素发生高亲和力的结合。最后加入TMB显色底物,在HRP的催化下,底物发生显色反应(通常变为蓝色)。
终止与定量:加入酸性终止液(如硫酸)终止反应,溶液颜色由蓝变黄。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。样本中LIPH的浓度与OD值在一定范围内呈正相关,通过绘制标准曲线即可计算出样本中LIPH的精确浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人脂肪酶H(LIPH)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031434 |
| 英文名称 |
Human Lipase H(LIPH)ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
灵敏度 (Sensitivity):指试剂盒能检测到的最低浓度。不同试剂盒的灵敏度有所差异,通常在 < 0.938 ng/mL 左右。
检测范围 (Assay Range):指试剂盒能准确定量的浓度区间。市面上常见的LIPH试剂盒检测范围多为 1.56 - 100 ng/mL。如果样本浓度超出该范围,需用样本稀释液适当稀释后复测。
特异性 (Specificity):优质的试剂盒对人源天然或重组的LIPH具有高度特异性,与其他结构相似的蛋白或细胞因子无显著交叉反应。
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度