人整合素α7(ITGα7)ELISA试剂盒
检测原理:
包被与捕获:将特异性的人ITGα7抗体预先包被在酶标板的微孔中,形成固相抗体。
加样与孵育:向微孔中加入标准品或待测样本(如血清、血浆、组织匀浆等),样本中的ITGα7蛋白会与固相抗体结合,被捕获在微孔中。
加检测抗体:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的抗人ITGα7检测抗体。该抗体与ITGα7蛋白的另一个位点结合,形成“固相抗体-抗原-检测抗体”的夹心免疫复合物。
加酶结合物:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)。生物素与亲和素的特异性结合使得HRP被连接到免疫复合物上。
显色与检测:彻底洗涤后,加入TMB底物溶液。固相捕获的HRP会催化无色的TMB变成蓝色。最后加入终止液(通常是强酸),反应终止,颜色变为黄色。
结果计算:颜色的深浅与样本中ITGα7的浓度成正比。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准品浓度和OD值绘制的标准曲线,即可计算出样本中ITGα7的浓度。
产品名称:
人整合素α7(ITGα7)ELISA试剂盒
英文名称:Human Integrin Alpha 7(ITGa7)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031411
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
不同品牌和型号的试剂盒性能参数存在差异,以下是基于现有产品信息的常见参数示例:
灵敏度 (Sensitivity):指试剂盒能够检测到的最低ITGα7浓度。不同产品的灵敏度有所不同,例如部分产品的灵敏度可达 5.0 pg/mL。
检测范围 (Detection Range):指试剂盒能够准确定量的浓度范围。一个典型的检测范围是 31.2 - 1000 pg/mL。
特异性 (Specificity):指试剂盒只与目标蛋白(人ITGα7)反应,而不与其他相似蛋白发生交叉反应的能力。优质的试剂盒会验证其能识别
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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