人着丝粒蛋白E(CENPE)ELISA试剂盒
检测原理:
该试剂盒利用免疫学中的抗原-抗体特异性反应。微孔板(固相载体)上预先包被了针对人CENPE的特异性抗体(捕获抗体)。整个反应过程大致如下:
加样与结合:将标准品或待测样本(细胞裂解液、组织匀浆等)加入微孔中,样本中的CENPE抗原与板上固定的捕获抗体特异性结合。
检测抗体结合:加入生物素(Biotin)标记的检测抗体,它会与CENPE抗原的另一位点结合,形成“固相抗体-CENPE抗原-生物素标记抗体”的复合物(即“夹心”结构)。
酶标结合:加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素(Avidin)。由于亲和素与生物素具有极高的亲和力,HRP会结合到复合物上。
显色反应:加入TMB底物溶液。HRP催化TMB显色,溶液由无色变为蓝色。
终止与读数:加入终止液(通常为硫酸),溶液颜色由蓝色变为黄色。颜色的深浅与样本中CENPE的浓度呈正相关。使用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值)。
产品名称:
人着丝粒蛋白E(CENPE)ELISA试剂盒
英文名称:Human Centromere Protein E(CENPE)ELISA Kit
规格:48T/96T
货号:LZ-E031396
用途:仅供科研研究实验
核心概览:
参数项目 典型指标范围 说明
检测范围 0.312 - 20 ng/mL 也有部分高灵敏度版本提供 0.156 - 10 ng/mL 的范围。
灵敏度 < 0.124 ng/mL 最小可检测剂量,反映试剂盒的检测下限。
特异性 高 可检测天然及重组CENPE,不与其它着丝粒蛋白家族成员发生交叉反应。
重复性 (精密度) 板内 CV < 10%
板间 CV < 12% CV(变异系数)越小,结果越稳定可靠。
样本处理要求:
1、血清:全血室温静置2小时或4℃过夜,1000×g离心20分钟取上清;可暂存于-20℃或-80℃,避免反复冻融
2、血浆:推荐使用EDTA或肝素抗凝管采集,采样后30分钟内于2–8℃、1000×g离心15分钟,取上清检测
3、组织匀浆:用预冷PBS冲洗组织去除残留血液,按1:9(重量:体积)比例加入含蛋白酶抑制剂的PBS进行研磨,超声或反复冻融辅助裂解后,5000×g离心5–10分钟取上清
检测流程简要:
一、试剂平衡:将试剂盒各组分于室温放置20分钟,恢复至常温。
二、加样:设空白孔、标准品孔(梯度浓度)、待测样本孔,每孔加入50μL样本或标准品。
三、孵育结合:每孔再加入HRP标记抗体100μL,37℃避光温育60分钟。
四、洗涤:弃液后用洗涤液洗板5次,拍干。
五、显色:每孔加TMB显色液A、B各50μL,37℃避光反应15分钟。
六、终止:每孔加50μL终止液,颜色由蓝转黄。
七、读数:15分钟内于450nm测定OD值,绘制标准曲线并计算浓度。
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注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡60分钟。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
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