包被:将特异性的人HEM1捕获抗体预先包被在酶标板的微孔上,形成固相载体。
结合:向微孔中加入标准品或待测样本(如血清、血浆等),样本中的HEM1抗原会与固相载体上的捕获抗体特异性结合。
检测:洗去未结合的物质后,加入生物素标记的HEM1检测抗体,该抗体与已结合的HEM1抗原形成“抗体-抗原-抗体”的夹心复合物。
酶联:再次洗涤后,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素。链霉亲和素与生物素标记的检测抗体高亲和力结合。
显色:加入TMB底物溶液,HRP催化TMB显色,溶液变为蓝色。颜色的深浅与样本中HEM1的浓度呈正相关。
终止与读数:加入终止液(通常为硫酸)终止反应,溶液由蓝色变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值),通过标准曲线计算样本中HEM1的浓度。
产品属性
| 产品名称 |
人造血蛋白1(HEM1)ELISA试剂盒 |
货号 |
LZ-E031370 |
| 英文名称 |
Human Hematopoietic Protein 1(HEM1)ELISA Kit |
规格 |
48T/96T |
| 用途 |
仅供科研实验 |
品牌 |
联祖 |
主要产品性能
不同品牌或型号的试剂盒性能参数存在差异,以下是常见参数的范围:
灵敏度:不同试剂盒的检测下限差异较大,范围可从 18.75 pg/mL 到 0.094 ng/mL 不等。
检测范围:常见的检测范围包括 31.25 - 2000 pg/mL 和 0.156 - 10 ng/mL 等。
特异性:试剂盒对HEM1具有高特异性,通常不与其它结构类似物发生交叉反应。
样本类型:适用于人血清、血浆(EDTA、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆液及其他生物液体。
ELISA试剂盒实验
第一阶段:准备工作 (Pre-preparation)
试剂回温:从冰箱取出试剂盒,将所有试剂(包括浓缩洗涤液、标准品、样本等)在室温(20-25℃)下平衡至少 30分钟。
注意:如果浓缩洗涤液有结晶,需置于37℃水浴助溶并混匀。
标准品稀释:按照说明书要求,使用专用稀释液对标准品进行梯度稀释(通常做7-8个浓度点),现配现用。
样本处理:确保血清、血浆或细胞上清液澄清无沉淀(如有沉淀需再次离心)。
第二阶段:加样与孵育
加样:
在酶标板的对应孔中,分别加入 100 µL(具体体积看说明书)稀释好的标准品和待测样本。
设置空白孔(只加稀释液)。
建议:每个样本做2-3个复孔,数据更可靠。
孵育:
盖上封板膜,放入 37℃ 恒温箱孵育 1-2小时(或按说明书要求,如室温2小时)。
原理:让样本中的抗原与板上的捕获抗体结合。
第三阶段:洗板与检测抗体
洗板(关键步骤):
弃去孔内液体,每孔加满洗涤液(约300-350 µL),静置浸泡 30-60秒 后甩干。
重复洗涤 3-5次。最后一次需在吸水纸上用力拍干,确保无残留液体。
加检测抗体:
每孔加入 100 µL 稀释好的检测抗体工作液(生物素化抗体)。
盖上封板膜,37℃ 孵育 1小时。
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ELISA试剂盒性能指标速查表
性能指标 关键参数 优质标准参考 意义
灵敏度 最低检测限 (LoD) 数值越低越好 能否测出微量样本
特异性 交叉反应率 < 5% (越低越好) 是否只测目标物,不误判
精密度 变异系数 (CV) 批内 < 10%, 批间 < 15% 结果是否稳定、可重复
准确性 回收率 80% - 120% 结果是否接近真实值
线性范围 标准曲线区间 覆盖样本预期浓度 能否准确定量高低浓度